發布時間：2020-02-14所屬分類：醫學職稱論文瀏覽：1次
摘 要： 摘 要：使用A型和B型兩種不同的明膠制備止血微球，對比其對兔耳緣靜脈和兔肝創面止血的效果。采用水油乳化法制備明膠止血微球，并用低濃度的戊二醛溶液對其交聯;通過吸水率、體外全凝血實驗、兔耳緣靜脈和兔肝創面止血實驗對比了兩種明膠微球止血效果上的差
摘 要：使用A型和B型兩種不同的明膠制備止血微球，對比其對兔耳緣靜脈和兔肝創面止血的效果。采用水油乳化法制備明膠止血微球，并用低濃度的戊二醛溶液對其交聯;通過吸水率、體外全凝血實驗、兔耳緣靜脈和兔肝創面止血實驗對比了兩種明膠微球止血效果上的差異。結果表明：B型明膠微球吸水率更高、凝血效果更好、兔耳緣靜脈和兔肝創面止血時間更短;兩種明膠微球都能促進止血，但B型明膠微球止血效果優于A型明膠微球。
關鍵詞：明膠;微球;止血
1概述
失血是導致傷者在意外事故中死亡的主要原因之一[1]。戰爭和突發性的自然災害造成的死亡人群中，有90%以上都與未能及時止血有關[2]。一般成年人總血量為4000mL左右，當失血達到人體總血量的1/3時就會出現休克，當失的血液達到人體總血量的一半時，人體的各個組織或者器官就會嚴重受損，如果得不到救治很快就會導致死亡。所以止血在突發意外和手術過程中顯得尤為的重要。
明膠，膠原水解之后的一類蛋白質，是一種天然的高分子材料。它是有特定的氨基酸序列構成，并且明膠中甘氨酸、脯氨酸和羥脯氨酸的含量很高，在結構上，明膠分子還包含重復的甘氨酸-X-Y結構，其中X、Y為脯氨酸或羥脯氨酸。所以明膠分子中含有大量的羥基羧基和氨基，具有較強的吸水能力，明膠繼承了膠原很多的特殊性質，如：可生物吸收性，生物相容性，易加工性，并且明膠分子有許多暴露的活性側基，化學反應活性很高，這就使得明膠很容易進行化學改性。從1945年Correll和Wise首次將明膠作為止血敷料用于臨床手術中以后，明膠作為一種具有止血效果的生物材料，開發出了許多各類形態的止血材料，如：纖維網狀、多孔海綿狀、薄膜狀等。
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本研究采用水油乳化法制備明膠微球，并使用戊二醛作為交聯劑改善其熱學及化學穩定，通過體外凝血實驗、兔耳緣靜脈和兔肝創面止血實驗研究了兩種不同類別的明膠(A型和B型明膠)制備的微球的止血效果。
2材料與方法
2.1試劑及儀器
A型明膠(gelatintapeA)和B型明膠(gelatintypeB)：Sigma進口分裝;50%戊二醛、丙酮、異丙醇、span-80和液體石蠟：成都科龍化工試劑廠;電子天平，型號BSA224S：塞多利斯科學儀器有限公司;電動攪拌機：江蘇省金壇市鴻科儀器廠。
2.2實驗方法
2.2.1明膠微球的制備
采用水油乳化法制備明膠微球。將1g明膠在45℃下溶于10mL去離子水中得到明膠溶液，將明膠溶液滴入45℃的300mL液體石蠟中同時加入9mLspan-80，攪拌15min，攪拌速度1000r/min。隨后冰水浴15min使溫度降至10℃以下。過濾并用丙酮和異丙醇交替洗滌6次，室溫烘干后用10mol/L的戊二醛溶液交聯8h，最后再使用丙酮和異丙醇交替洗滌6次得到明膠微球。
2.2.2掃描電鏡觀察明膠微球形貌
樣品表面噴金，使用掃描電鏡(日本HITACHIS-4800)觀察微球形貌。
2.2.3體外全凝血測定
體外全凝血的測定采用Gu等的方法。將處理好的抗兔凝血液從冰箱中取出，在37℃的水浴中孵浴，待完成后用移液槍取200µL放入潔凈的10mL塑料離心管，分別加入稱量好的0.1g的試樣，不加任何材料的作為空白組，每一份樣品設三支離心管。將各管中的血液與樣品輕輕搖勻，使得血液都在試管的底部，取20µL氯化鈣溶液滴加入離心管中并開始進行凝血計時，分別在時間刻度為60s，120s，240s時計時完畢。之后加入去離子水10mL，待上下振動離心管3次，穩定后吸取上清液100µL于96孔板中。用紫外分光光度計在波長540nm處測其吸光度。
2.2.4兔耳緣靜脈止血
取體重為2~2.5kg的新西蘭大白兔按照30mg/kg的劑量，采用3%的戊巴比妥鈉麻醉劑靜脈注射對其麻醉然后固定四肢。使用脫毛劑處理兔子耳背面的毛發，暴露耳靜脈。用碘酒和醫用消毒酒精對耳朵背部消毒后，將耳緣靜脈橫切切斷，在自由出血3s后，用滅菌紗布輕輕的將耳朵傷口上的浮血擦去，并立刻將明膠微球撒在傷口處，每15s觀察一次，直到傷口不再出血為止，記錄出血時間。自然止血組不作任何止血處理，同樣待不再滲血后記錄出血時間。每組實驗重復三次。
2.2.5兔肝創面止血
取體重為2-2.5kg的新西蘭大白兔按照30mg/kg的劑量，采用3%的戊巴比妥鈉麻醉劑靜脈注射對其麻醉然后固定四肢。使用脫毛劑處理下兔子腹部的毛發，用碘酒和醫用消毒酒精對腹部手術部位消毒后，于兔子的腹中線作一長約5cm縱行切口，暴露肝臟，用刀片在肝臟中葉切1cm×1cm，深0.5cm的十字型傷口，在自由出血3s后，用滅菌紗布將傷口上的浮血輕輕擦去，并立刻將明膠微球撒在傷口處，每15s觀察一次，直到傷口不再出血為止，記錄出血時間。自然止血組不作任何止血處理，同樣待不再滲血后記錄出血時間。每組實驗重復三次。
2.2.6數據分析
采用SPSSStatistics17.0軟件進行ANOVA分析，實驗數據以均數±標準差表示，組間比較采用t檢驗分析P<0.05為差異有顯著性意義，用**代表差異P<0.01。
3結果與討論
3.1明膠微球形貌
圖1A和1B分別是A型和B型明膠微球形貌SEM圖，微球球形度好，并且表面光滑無明顯團聚現象，且A，B型明膠微球粒徑在為10~30μm。
3.2體外全凝血實驗
OD值是表示被檢測樣品溶液吸光度的物理量，吸光度越低代表上清液中殘留的血細胞越少，說明樣品的凝血性能更好。如圖2所示，在第1、2和4min時，兩種明膠微球的凝血性能都優于空白對照組，且B型明膠微球的凝血性能優于A型明膠微球，這說明明膠微球有利于促進血液的凝固從而達到快速止血。
3.3耳緣靜脈止血
如圖3A所示是兩種微球耳緣靜脈止血時間，A型和B型明膠微球的止血時間分別為64s和55s，且顯著低于空白組的止血時間，表明兩種明膠微球對兔耳緣靜脈出血有明顯的止血效果。由于B型明膠微球的吸水率更高和帶有更多的負電荷，B型明膠微球的止血時間要高于A型明膠微球，這表明止血時間與吸水率和表面負點電荷的多少呈正相關關系。這可能是由于微球表面的負電荷能誘導凝血FXⅡ因子的激活和促進它激活。圖3B是使用B型明膠微球止血完畢后的照片，止血完成后，未見微球被血液浸濕，說明微球有良好的止血效果。
3.4兔肝創面止血
如圖4A所示是兩種微球兔肝臟創面止血時間，A型和B型明膠微球的止血時間分別為125s和114s，且顯著低于空白組的止血時間，表明兩種明膠微球對兔肝臟創面出血有明顯的止血效果。這與上述兔耳緣靜脈止血實驗結果相符。圖4B是B型明膠微球止血后的效果圖，可以看到，止血完畢后微球緊緊黏在肝臟表面并形成了類似糊狀的基質，由此封堵住傷口，達到止血。且傷口表明微球未被血液浸濕，表明微球有良好的止血效果。
4結束語
明膠在人體溫環境下就會溶解，所以適當交聯以提高其化學和熱學穩定，使之能應用于人體溫環境。制得的明膠微球粒徑為10~30μm，表面光滑，成球性良好。從體外凝血和體內止血效果上看，B型明膠明膠微球都優于A型明膠微球，其主要的原因是由于B型明膠微球有較高的吸水率，使得B型明膠微球能更快吸收血液中的水分凝聚血小板和紅細胞并形成物理性封堵，從而提高其止血效果。
SCISSCIAHCI
