發(fā)布時(shí)間：2022-05-24所屬分類：農(nóng)業(yè)論文瀏覽：1次
摘 要： 摘 要：目的：掌握馬齒莧多不飽和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids，PUFAs)各成分相對(duì)含量并探究馬齒莧純化油對(duì) HepG2 細(xì)胞脂質(zhì)堆積的影響程度。方法 采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用手段對(duì)馬齒莧全草油以及純化油的脂肪酸成分進(jìn)行分析。利用 MTT 法測(cè)定不同馬齒莧純化油濃度
摘 要：目的：掌握馬齒莧多不飽和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids，PUFAs)各成分相對(duì)含量并探究馬齒莧純化油對(duì) HepG2 細(xì)胞脂質(zhì)堆積的影響程度。方法 采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用手段對(duì)馬齒莧全草油以及純化油的脂肪酸成分進(jìn)行分析。利用 MTT 法測(cè)定不同馬齒莧純化油濃度對(duì)細(xì)胞存活率的影響并選定適宜濃度范圍進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。通過(guò)油紅 O 染色法判斷油酸誘導(dǎo)建造的脂質(zhì)堆積模型是否造模成功，并采用試劑盒測(cè)定方法明確低、中、高劑量組(即 60、80、100 μg/mL)純化油濃度對(duì)高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein-cholesterol，HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein-cholesterol，LDL-C)、總膽固醇(total cholesterol，TC)、甘油三酯(triglyceride，TG)水平的影響。結(jié)果：馬齒莧全草中的 PUFAs 組成有三種：亞油酸、α-亞麻酸和γ-亞麻酸。馬齒莧全草油中 PUFAs 相對(duì)含量為 27.6104%，富集純化后純化油相對(duì)含量高達(dá) 73.9015%。MTT 法選定的純化油濃度范圍為 60~ 100 μg/mL，且馬齒莧純化油高劑量組(100 μg/mL)與模型組相比，HDL-C 濃度極顯著升高，LDL-C 、TC 以及 TG 濃度均極顯著降低(P<0.01)。結(jié)論馬齒莧純化油中 PUFAs 相對(duì)含量較高基本達(dá)到純化目的，馬齒莧 PUFAs 對(duì)脂肪肝有較好的緩解效果，表現(xiàn)出較強(qiáng)的體外降脂能力。
關(guān)鍵詞：藥食同源;馬齒莧;PUFAs;HepG2 細(xì)胞;脂質(zhì)堆積
非過(guò)量飲酒以及其他損害肝臟因素造成肝細(xì)胞脂肪沉積變性等特征的綜合病癥被稱之為非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)[1]。全球肥胖的流行顯著增加了 NAFLD 的患病率，使 NAFLD 成為西方國(guó)家最常見(jiàn)的慢性肝病病因，據(jù)統(tǒng)計(jì)肥胖成年人病發(fā)率已達(dá)到 50.7%[2,3]，長(zhǎng)此以往 NAFLD 將會(huì)與糖尿病、高胰島素血癥、高血壓等病癥結(jié)合逐漸演變?yōu)橹拘愿窝祝瑥亩黾痈斡不㈤T(mén)靜脈高壓癥以及肝癌等疾病高發(fā)風(fēng)險(xiǎn)[4-6]。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外對(duì) NAFLD 的治療方式逐漸從對(duì)藥物的全部依賴轉(zhuǎn)變?yōu)檎{(diào)整飲食習(xí)慣[7-10]，有利于功能食品以及藥食同源中藥材的長(zhǎng)遠(yuǎn)發(fā)展。
脂肪酸(fatty acid，F(xiàn)A)是具有長(zhǎng)的碳?xì)滏満?1 個(gè)羧基末端的有機(jī)化合物的總稱。自然界中約有 70 多種不同種類的脂肪酸，其碳鏈長(zhǎng)度范圍為 C12~ C18。按照脂肪酸碳鏈結(jié)構(gòu)中雙鍵數(shù)的多少可將其劃分為飽和脂肪酸(saturated fatty acid，SFA)、單不飽和脂肪酸(monounsaturated fatty acid，MUFA)和 PUFAs。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，PUFAs 在抗炎、抗氧化、抗癌、調(diào)節(jié)血脂、增強(qiáng)免疫、改善記憶力以及促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育等方面具有顯著的效果[11-14]。石計(jì)朋[15]通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究推測(cè) ω-3 系列 PUFAs 可以通過(guò)激活 PI3K/AKT/β-catenin 信號(hào)軸間接促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞的增殖和遷移、抑制神經(jīng)細(xì)胞的凋亡，從而發(fā)揮對(duì)受損腦組織和神經(jīng)細(xì)胞的治療作用。PUFAs 同時(shí)具有抗炎和炎癥消退作用，陳英杰等人通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法檢測(cè)血清中腫瘤壞死因子(TNF)-α、白細(xì)胞介素(IL)-1、IL-6 等指標(biāo)判斷 PUFAs 是否對(duì)重型顱腦損傷患者炎癥反應(yīng)以及神經(jīng)細(xì)胞有影響，結(jié)果表明 ω-3 系列 PUFAs 可以減輕傷后發(fā)生炎癥反應(yīng)，減少神經(jīng)膠質(zhì)和神經(jīng)元細(xì)胞損害，從而起到抗炎和神經(jīng)保護(hù)作用[16,17]。Ayumi Taguchi[18] 通過(guò)試驗(yàn)研究認(rèn)為 PUFAs 具有抗癌、抗腫瘤作用是由于腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞(CAFs)中的基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-9 在體內(nèi)外均會(huì)受到 ω-3 系列 PUFAs 的抑制造成的。胡慧蕓[19]認(rèn)為 PUFAs 具有顯著的降血脂功效，并將實(shí)驗(yàn)室制備的 PUFAs 軟膠囊通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)研究進(jìn)行驗(yàn)證，證實(shí)了 PUFAs 可以顯著降低混合型高脂血癥大鼠的血脂水平、明顯減輕混合型高脂血癥大鼠的炎癥反應(yīng)，其作用機(jī)制可能分別與脂質(zhì)代謝相關(guān)基因 HMGR、PPARα、SREBP-1c 的表達(dá)有關(guān)、與調(diào)節(jié)驗(yàn)證信號(hào)通路 AMPK/SIRT1/NF-κB 及 VCAM-1 的表達(dá)有關(guān)。而馬齒莧作為藥食同源植物資源之一，性味酸寒，具有清熱解毒，涼血止血等功效，現(xiàn)代藥理學(xué)作用研究也表明馬齒莧在抗炎、抗氧化、抗腫瘤等方面有顯著效果[20]，由于近年來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)藥食同源馬齒莧中藥材中的脂肪酸成分研究較少以及國(guó)內(nèi)對(duì) PUFAs 作用逐步重視，因此本試驗(yàn)基于國(guó)內(nèi)外各學(xué)者以及本實(shí)驗(yàn)室人員前期試驗(yàn)基礎(chǔ)對(duì)馬齒莧脂肪酸成分進(jìn)行深入創(chuàng)新研究。
本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)比馬齒莧全草油和純化油脂肪酸成分相對(duì)含量明確純化油的純化程度，并將純化油作用于油酸誘導(dǎo)成功的脂質(zhì)堆積肝癌細(xì)胞模型，在檢測(cè)血脂指標(biāo) HDL-C、LDL-C、 TC、TG 水平變化后明確馬齒莧純化油對(duì)脂質(zhì)沉積的影響，進(jìn)而初探馬齒莧純化油中 PUFAs 的降脂能力。
1 材料與方法
1.1 材料與儀器
新鮮馬齒莧全草 山東濱州種植基地;人肝癌細(xì)胞 HepG2 上海泛柯實(shí)業(yè)有限公司; MTT、HDL-C、LDL-C、TC、TG 試劑盒 南京建成生物科技有限公司;石油醚(分析純)、尿素(分析純)、無(wú)水乙醇(分析純)、甲醇(色譜純)、異丙醇(分析純)、鹽酸(分析純)、無(wú)水硫酸鈉、正己烷(分析純)、濃硫酸(分析純) 天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司;胰酶、優(yōu)級(jí)胎牛血清、DMED 高糖培養(yǎng)基、牛血清白蛋白(不含脂肪酸)、多聚甲醛固定液 北京索萊寶科技有限公司;蘇丹紅、油酸(分析純) 上海麥克林生化科技有限公司
YM- 828H 多功能加熱破壁料理機(jī) 中山市優(yōu)盟電器有限公司;SB25-120 超聲波清洗機(jī)寧波新芝生物科技股份有限公司;SHZ- D(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵 鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司;SY- 2000 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器廠;GZX- 9140MBE 電熱鼓風(fēng)干燥箱 上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠;AR223CN 電子天平 奧豪斯儀器有限公司;Agilent Technologies 7890B/5977B 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀 鄭州澤銘科技有限公司;BDS400 倒置生物顯微鏡 重慶奧特光學(xué)儀器有限責(zé)任公司;SPECTRA MAX190 酶標(biāo)儀 北京生原誠(chéng)業(yè)科技有限公司
1.2 實(shí)驗(yàn)方法
1.2.1 馬齒莧全草油的制備
將山東濱州種植基地的新鮮馬齒莧全草洗凈、破壁后適當(dāng)瀝干。準(zhǔn)確稱取 10.00 g 左右瀝干物于平底燒瓶中，按照料液比 1: 22(m: V)加入 60~ 90℃石油醚 220 mL，并于超聲溫度 70℃、超聲時(shí)間 61 min、超聲功率 500 W 條件下進(jìn)行提取，提取液濃縮(比例為 49: 1， V: V)恒重后即得馬齒莧全草油樣品[21]。
1.2.2 馬齒莧純化油的制備[21]
準(zhǔn)確稱取 12.00 g 尿素于 60℃水浴條件下溶于 120 mL 95%乙醇溶液中，即得樣液 A。將樣液 A 趁熱迅速置于 1.00 g 馬齒莧全草油樣品中使樣品溶解，在 60℃水浴條件下持續(xù)攪拌 10 min 后冷卻至室溫，置于-20℃條件下進(jìn)行下一步結(jié)晶，6 h 后取出迅速抽濾，將濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后恒重，即得浸膏物。將浸膏物中加入 5 mL 蒸餾水，用 HCl 調(diào)節(jié) pH 值至 5~ 6 后加 10 mL 石油醚進(jìn)行萃取，用蒸餾水洗滌石油醚層直至尿素試紙檢測(cè)無(wú)尿素即可停止，無(wú)水硫酸鈉干燥 4 h 后，即可得到馬齒莧純化油。
1.2.3 馬齒莧脂肪酸純化前后組成分析
1.2.3.1 馬齒莧全草油、純化油樣品的甲酯化
稱量馬齒莧全草油、純化油樣品各 100 mg，向其中各依次加入 3 mL 正己烷和 2 mL 5% H2SO4-甲醇溶液，搖勻 3 min 后置于 60℃條件下水浴 30 min，再次各加入 3 mL 蒸餾水，搖勻 2 min，等分層清晰后取上清液，經(jīng) 0.45 μm 有機(jī)濾膜過(guò)濾后備用GC 條件：PEG-20M 彈性石英毛細(xì)管柱，30 m×0.25 m×0.25 μm，載氣為 N 2，載氣流速為 0.8 mL·min-1，程序升溫從 180℃開(kāi)始(保持 2 min)，以 3 ℃·min-1 升溫到 230 ℃，保持 10 min，進(jìn)樣口溫度 250℃，出樣口溫度 200℃，檢測(cè)電壓 350 V，不分流進(jìn)樣。 MS 條件：EI 離子源，電子能量 70 eV，發(fā)射電流 200 μA，掃描范圍 20~ 550 amu，全離子掃描。
1.2.4 馬齒莧純化油對(duì) HepG2 細(xì)胞增殖和脂質(zhì)堆積的影響
1.2.4.1 不同馬齒莧純化油濃度對(duì) HepG2 細(xì)胞存活率的影響
將培養(yǎng)的 HepG2 細(xì)胞用胰酶消化后接種于 96 孔板中，使每孔細(xì)胞數(shù)量大致為 1×104個(gè)后，置于 CO2 培養(yǎng)箱貼壁培養(yǎng) 24 h，各個(gè)孔分別加入 100 μL 用 5% BSA 配制的濃度分別為 0、10、20、40、60、80、100、200、400、800、1600 μg/mL 的馬齒莧純化油，最后用完全培養(yǎng)基補(bǔ)足體積，使得每孔總體積為 200 μL，各給藥濃度設(shè)置 5 個(gè)重復(fù)。置于 CO2培養(yǎng)箱中作用 24 h 后，參照 MTT 試劑盒用法測(cè)定不同馬齒莧純化油濃度所對(duì)應(yīng)的細(xì)胞存活率。
1.2.4.2 油紅 O 染色法觀察油酸誘導(dǎo)的 HepG2 細(xì)胞內(nèi)脂滴形成情況
將正常培養(yǎng)的 HepG2 細(xì)胞用胰酶消化后接種于 6 孔板中，加入培養(yǎng)基正常培養(yǎng) 24 h 后棄去培養(yǎng)液并用 PBS 清洗。將 6 孔板分為兩組：0.5% 不含脂肪酸的牛血清白蛋白(Fatty acid-free bovine serum albumin，BSA)組和 0.5 mmol/L 油酸(使用 0.5% BSA 配制而成)組，各設(shè)置 3 個(gè)復(fù)孔。各孔板中加入對(duì)應(yīng)組別溶液 3 mL，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng) 24 h。取出 6 孔板棄去培養(yǎng)液，用 PBS 清洗 2 遍后每孔加入 2 mL 4%多聚甲醛細(xì)胞固定液固定 30 min。固定結(jié)束后棄去固定液，用 PBS 清洗 2 遍，靜置 30 s，再向每孔加入 2 mL 現(xiàn)配的 60%異丙醇滴洗 20~ 30 s，棄去異丙醇后靜置 1 min。之后每孔加入油紅 O 染色液(油紅原液: 蒸餾水=3: 2， V: V)2 mL，密閉染色 20 min 后將染色液棄去，加入 2 mL 60%異丙醇分化 10 s，靜置 1 min，再加入 PBS 清洗 2 遍，各孔再加入 3mL PBS 即可置于倒置顯微鏡下觀察。
1.2.4.3 造模后不同組別細(xì)胞內(nèi)血脂指標(biāo)水平變化情況
將正常培養(yǎng)的 HepG2 細(xì)胞用胰酶消化后接種于 96 孔板中，置于 CO2 培養(yǎng)箱貼壁培養(yǎng) 24 h，并將接種細(xì)胞的孔分為 5 組(每組設(shè)置 5 個(gè)重復(fù))：對(duì)照組、模型組、低劑量組、中劑量組和高劑量組。造模：對(duì)照組中加入 0.5% BSA 溶液 200 μL，其余組別各加入 200 μL 0.5 mmol/L 的油酸進(jìn)行誘導(dǎo)造模，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng) 24 h。給藥：取出細(xì)胞后棄去溶液并用 PBS 清洗，在對(duì)照組和模型組中各加入 0.5% BSA 溶液 200 μL，低、中、高劑量組分別加入 60、 80、100 μg/mL 的馬齒莧純化油各 200 μL，置于 CO2培養(yǎng)箱中作用 24 h 后取出，并參照 HDL-C、 LDL-C、TC、TG 各試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行濃度測(cè)定。
1.3 數(shù)據(jù)處理
各組數(shù)據(jù)均采用 Graphpad Prism V6.01 軟件進(jìn)行分析并通過(guò) t 檢驗(yàn)的方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P<0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果與分析
2.1 馬齒莧脂肪酸純化前后成分對(duì)比
對(duì)馬齒莧脂肪酸成分進(jìn)行分析有利于掌握每種成分的相對(duì)含量，且可以明確富集純化的程度，從而得到馬齒莧脂肪酸富集前后 PUFAs 的純度變化。由表 1 脂肪酸成分分析表可以得知，馬齒莧全草油中含有的 PUFAs 相對(duì)含量為 27.6104%，PUFAs 種類主要為亞油酸和 α亞麻酸。除 PUFAs 之外還有 SFA：月桂酸、肉豆蔻酸、十五碳酸、棕櫚酸、花生酸、十七碳酸、硬脂酸、二十二碳酸、二十三碳酸和二十四碳酸共 10 種，相對(duì)含量總和為 67.1861%; MUFA：棕櫚油酸和油酸共兩種，相對(duì)含量總和為 5.2035%。而馬齒莧純化油中的 PUFAs 相對(duì)含量高達(dá) 73.9015%，其中的 PUFAs 種類除亞油酸和 α-亞麻酸外還增添了 γ-亞麻酸，在全草油中未檢測(cè)出此物質(zhì)的原因可能是全草油中 γ-亞麻酸含量低于儀器檢測(cè)下限，而純化后馬齒莧純化油中的 γ-亞麻酸濃度顯著升高，高于檢測(cè)下限造成此物質(zhì)被檢出。而且馬齒莧純化油中 SFA 相對(duì)含量總和為 18.7997%，MUFA 相對(duì)含量總和為 7.2988%，馬齒莧純化油中的 SFA 以及 MUFA 相對(duì)含量總和與全草油相比均有不同程度降低，且馬齒莧純化油中已經(jīng)無(wú)二十三碳酸出現(xiàn)。因此，由表 1 可以得出結(jié)論：馬齒莧純化油 PUFAs 純度(73.9015%)高于全草油 PUFAs 純度(27.6104%)，且高出 46.2911%，純化后純度基本達(dá)到實(shí)驗(yàn)預(yù)期設(shè)想，因此以純化油進(jìn)行后續(xù) PUFAs 的體外降脂作用研究。
2.2 不同馬齒莧純化油濃度對(duì)細(xì)胞存活率的影響
不同給藥濃度對(duì)人肝癌 HepG2 細(xì)胞有一定的影響，在一定程度上可能對(duì)細(xì)胞造成毒性作用，因此本試驗(yàn)將采用 MTT 法考察不同馬齒莧純化油濃度對(duì)細(xì)胞存活率的影響，從而確定適宜細(xì)胞生長(zhǎng)的純化油濃度，避免在后續(xù)試驗(yàn)過(guò)程中濃度太高對(duì)細(xì)胞造成毒性作用。如圖 1 所示，不同濃度組別與對(duì)照組相比細(xì)胞存活率均極顯著降低，當(dāng)馬齒莧純化油濃度為 0~ 10 μg/mL 時(shí)，細(xì)胞存活率由 100%± 1.61%緩慢下降為 88.5731%±2.88%，濃度在 20~ 100 μg/mL 內(nèi)時(shí)，存活率由 86.1091%± 7.65%緩慢下降為 78.8954%±3.93%，而當(dāng)純化油濃度處于 200μg/mL~1600 μg/mL 時(shí)，細(xì)胞存活率急劇下降，由 63.5027%±1.72%下降至最低點(diǎn) 20.9023%± 4.87%。結(jié)果表明，不同濃度馬齒莧純化油對(duì)細(xì)胞存活率影響不同，10~ 60 μg/mL 純化油濃度范圍內(nèi)雖然細(xì)胞存活率較高，但是此范圍內(nèi)細(xì)胞存活率波動(dòng)幅度不如 60~ 100 μg/mL 濃度范圍內(nèi)波動(dòng)幅度穩(wěn)定，為排除其他因素干擾試驗(yàn)最終結(jié)果且綜合考慮細(xì)胞存活率在 80%左右以及細(xì)胞存活率穩(wěn)定性較好等情況，本試驗(yàn)選用純化油濃度在 60~ 100 μg/mL 左右范圍進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。
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2.3 油紅 O 染色法觀察油酸誘導(dǎo)的 HepG2 細(xì)胞內(nèi)脂滴形成結(jié)果
油紅 O 為脂溶性染料，在脂肪中溶解性較強(qiáng)，可特異性與細(xì)胞以及動(dòng)物組織內(nèi) TG 等中性脂肪著色，因此本試驗(yàn)采用油紅 O 染色法來(lái)判斷細(xì)胞脂質(zhì)堆積模型的建立。本試驗(yàn)參照張蕾等[22]人的方法采用 0.5 mmol/L 油酸誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞脂肪變性模型。由圖 2 可知，經(jīng)過(guò)油紅 O 染色后對(duì)照組的 HepG2 細(xì)胞形態(tài)正常，細(xì)胞呈現(xiàn)不規(guī)則形狀且細(xì)胞邊緣出現(xiàn)鮮少的粉色脂滴。與對(duì)照組相比，模型組細(xì)胞在視野范圍內(nèi)可大致觀察到細(xì)胞的形態(tài)基本保持正常，并且在細(xì)胞外側(cè)呈現(xiàn)大量紅色粒狀脂滴。表明使用 0.5 mmol/L 油酸誘導(dǎo)肝細(xì)胞脂肪變性造模成功，可以采用此油酸濃度進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。
2.4 造模后不同組別細(xì)胞內(nèi)血脂指標(biāo)水平變化結(jié)果脂肪是構(gòu)成身體細(xì)胞的重要成分之一，在人體腦神經(jīng)、肝臟、腎臟等重要器官中含有很多脂肪。本試驗(yàn)選用 HepG2 肝癌細(xì)胞進(jìn)行脂質(zhì)堆積模型的建造而非選用其他脂肪細(xì)胞的原因如下：肝臟為 HDL-C、LDL-C、TC、TG 合成的重要器官;建造脂肪變性細(xì)胞模型時(shí)大部分學(xué)者均以 HepG2 肝癌細(xì)胞作為對(duì)象[22,23]。
本試驗(yàn)為了解不同濃度的馬齒莧純化油對(duì) HepG2 細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)堆積的影響，在明確純化油濃度范圍為 60~ 100 μg/mL 后，將馬齒莧純化油濃度劃分為低、中、高劑量(即 60、80、 100 μg/mL)進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)血脂指標(biāo) HDL-C、LDL-C、TC 以及 TG 濃度的測(cè)定。
HDL-C 為強(qiáng)大的血管擴(kuò)張劑，人體內(nèi)此濃度的升高有利于預(yù)防冠心病等發(fā)生，對(duì)心血管具有保護(hù)作用[24]。由表 2 可知，與對(duì)照組相比，模型組細(xì)胞內(nèi)的 HDL-C 濃度由 0.2330 mmol/L 急劇降為 0.0100 mmol/L(P< 0.01)，而 LDL-C、TC、TG 濃度均有極顯著提高(P< 0.01)，再次證實(shí) HepG2 細(xì)胞脂質(zhì)堆積模型被成功建立。同時(shí)隨著給藥濃度的升高，模型組 HDL-C 濃度由 0.0100 mmol/L 逐漸升高到 0.1754 mmol/L(低劑量組)、0.2178 mmol/L (中劑量組)、0.4325 mmol/L(高劑量組)，且均具有極顯著差異(P< 0.01)，因此可初步表明馬齒莧純化油中的 PUFAs 可以促進(jìn) HDL-C 合成，此結(jié)果與 Xie Xianxing[25]學(xué)者所得結(jié)論“PUFAs 可通過(guò)調(diào)節(jié)參與肝 HDL-C 合成的關(guān)鍵基因、蛋白和 mRNA 表達(dá)促進(jìn) HDL-C 合成”相一致。
LDL-C 是一種運(yùn)送血液中脂類的一種脂蛋白顆粒，它可以將脂類物質(zhì)從肝臟運(yùn)送至血管內(nèi)皮細(xì)胞中從而有效減少臟器內(nèi)脂質(zhì)堆積，但是 LDL-C 過(guò)高會(huì)導(dǎo)致過(guò)量脂類被運(yùn)送后沉積于血管內(nèi)皮細(xì)胞造成動(dòng)脈粥樣硬化等疾病，因此適量的 LDL-C 可以有效降低冠心病、血栓等心腦血管疾病發(fā)生率[24,26]。由表 2 結(jié)果可以得出：與模型組相比，高劑量組 LDL-C 濃度極顯著降低(P< 0.01)，其余組別與模型組相比濃度無(wú)顯著性差異;而對(duì)照組相比，中、高劑量組 LDL-C 濃度無(wú)顯著差異。結(jié)果表明高劑量馬齒莧純化油可以通過(guò)顯著降低 LDL-C 濃度緩解細(xì)胞脂質(zhì)堆積作用，從而使細(xì)胞恢復(fù)正常生理活動(dòng)。
TC 是人體血液中所有脂蛋白中所含膽固醇的總和，TC 與人類冠心病、腦卒中、動(dòng)脈粥樣硬化等疾病息息相關(guān)，TC 濃度的減少表明人體內(nèi)膽固醇堆積較少，一定程度上此物質(zhì)的降低有利于減少脂質(zhì)堆積從而達(dá)到降血脂作用。由表 2 可知，中、高劑量組馬齒莧純化油可通過(guò)極顯著降低模型組 TC 濃度來(lái)緩解脂質(zhì)堆積作用(P< 0.01)，但是中、高劑量組給藥后的 TC 濃度極顯著高于對(duì)照組(P< 0.01)。結(jié)果表明中、高劑量馬齒莧純化油給藥后雖可以緩解細(xì)胞脂質(zhì)堆積但卻無(wú)法達(dá)到 HepG2 細(xì)胞正常 TG 濃度水平，猜測(cè)可能是給藥時(shí)間太短造成的。
TG 為人體供能源之一，此物質(zhì)在肝臟代謝后可被人體吸收成為營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，但過(guò)多的 TG 在體內(nèi)聚集會(huì)造成高脂血癥、非酒精性脂肪肝等，因此適量的 TG 可增加人體對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收能力，從而保障人體內(nèi)分泌平衡[27]。從表 2 可以看出，低、中、高劑量組 TG 濃度與模型組相比均呈現(xiàn)出極顯著降低現(xiàn)象(P< 0.01)且高劑量組 TC 濃度與對(duì)照組濃度相比無(wú)顯著變化，證實(shí)馬齒莧純化油中 PUFAs 可以通過(guò)此條途徑緩解模型組脂質(zhì)堆積現(xiàn)象，且高劑量純化油給藥后可以使細(xì)胞恢復(fù)至原始 TG 濃度水平。
綜上所述，高劑量組(100 μg/mL)馬齒莧純化油濃度對(duì)各項(xiàng)血脂指標(biāo)均有極顯著影響，且與對(duì)照組正常 HepG2 細(xì)胞內(nèi) TG、LDL-C 濃度相比無(wú)顯著變化，因此可以認(rèn)為此濃度的馬齒莧純化油對(duì)肝臟內(nèi)脂質(zhì)堆積具有較好的緩解效果。
3 討論與結(jié)論
經(jīng)過(guò)本試驗(yàn)對(duì)馬齒莧全草油和純化油脂肪酸成分的對(duì)比，發(fā)現(xiàn)馬齒莧全草油中 PUFAs 相對(duì)含量為 27.6104%，經(jīng)富集純化后的馬齒莧純化油中的 PUFAs 含量高達(dá) 73.9015%，表明尿素包合法富集純化馬齒莧全草油是有顯著效果的。而敬思群[28]學(xué)者試驗(yàn)結(jié)果表明尿素包合法純化馬齒莧全草油后 PUFAs 含量可由 68.12%升高到 91.35%，本試驗(yàn)結(jié)果 PUFAs 含量 73.9015% < 91.35%，造成此現(xiàn)象的原因可能是本試驗(yàn)耗材選用新鮮馬齒莧而非馬齒莧干藥材;選用馬齒莧的產(chǎn)地不同[29];提取馬齒莧全草中 PUFAs 時(shí)所用溶劑、技術(shù)不同造成的[30,31]。將馬齒莧純化油應(yīng)用于HepG2細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)經(jīng)100 μg/mL馬齒莧純化油干預(yù)后細(xì)胞內(nèi)HDL-C、 LDL-C、TC、TG 濃度與模型組相比均有顯著變化，其中 HDL-C 濃度顯著升高，其余濃度顯著降低，初步表明馬齒莧純化油對(duì)脂質(zhì)堆積具有緩解作用，對(duì)下一步深入研究降脂機(jī)制等的試驗(yàn)安排奠定了較好的實(shí)踐基礎(chǔ)。——論文作者：李冠文，王輝敏，楊金梅，陳超，張娜郡，秦楠，劉星*
