發布時間：2013-03-28所屬分類：醫學論文瀏覽：1次
摘 要： 醫學論文"葡萄糖激酶基因啟動子－30位點PCR擴增的實驗條件研究 論文發表"已完成論文發表流程，為保證"葡萄糖激酶基因啟動子－30位點PCR擴增的實驗條件研究 論文發表"論文的版權，不能夠完整瀏覽…… [申請瀏覽] 主要儀器：PE9600基因擴增儀；BIO-RAD Power P
醫學論文"葡萄糖激酶基因啟動子－30位點PCR擴增的實驗條件研究 論文發表"已完成論文發表流程，為保證"葡萄糖激酶基因啟動子－30位點PCR擴增的實驗條件研究 論文發表"……
主要儀器：PE9600基因擴增儀；BIO-RAD Power Pac 3000型電泳儀；Mini-PROTEIN Ⅱ型電泳槽及Gel Doc 1000紫外圖像分析系統；TJ－6型低溫離心機；430 pH計；p10, p100微量加樣器。
主要試劑：5O D 260的寡核苷酸引物；100m m ol/L的dNTP；低熔點瓊脂糖；5U/μl的Taq酶。
1.2 方法
模板的準備：本文使用的模板是從人體白細胞中應用酚/氯仿/異戊醇提取的基因組DNA [1]。提取的模板用100μl TE緩沖液，60℃加熱10－15分鐘溶解后，-20℃冰凍保存。
目的片段的擴增：寡核苷酸引物根據文獻報道設計：上游引物為5’-CAAGGCGATTGAGTGGTCACCATG-3’，下游引物為5’-GACTGTGTCTCTCACATCCTAGCC-3’，擴增片段長度為258個堿基。反應體系中模板1μl，10×緩沖液3μl，加雙蒸水至30μl條件不變，分別變化Taq酶、dNTP、引物、Mg 2+的濃度，按94℃預變性5min，后94℃1min，60℃1min，72℃1min進行35個循環，最后72℃延伸5min。用2％瓊脂糖凝膠電泳，透射式紫外燈下觀察擴增產物片段。
2 結果
2.1 PCR實驗條件 論文發表
2.1.1通常PCR實驗的酶用量范圍為0.5U-2U。其他擴增條件不變的情況下設定系列Taq酶量0.5～5U之間。
結果表明，均可以擴增出目的DNA，產物量之間并無差異，但5U時出現非特異性擴增。為了使以后擴增更加有效，選擇Taq酶量為1U。
2.1.2通常引物的濃度常用的范圍為0.1-1μmol/L。高濃度的引物可能會引起反應的錯配或非特異性產物。其他擴增條件不變的情況下設定系列引物濃度，范圍設計在0.1～1μmol/L的濃度之間。結果表明，均有產物擴出，引物二聚體的濃度依次增加，但引物濃度超過0.3μmol/L時產物量接近最高而二聚體的濃度相對低；當到達1μmol/L時二聚體明顯過剩，產物量反而降低；選擇引物二聚體較少而產物量高時的引物濃度0.3μmol/L為最佳濃度。
2.1.3一般反應中每種dNTP的最終濃度可為20-200μm
醫學論文葡萄糖激酶基因啟動子－30位點PCR擴增的實驗條件研究 論文發表[略]……………
一、概況 由于我國人民生活水平低和衛生資源潰乏，造成乙肝泛濫。據統計：我國有乙肝病毒攜帶者約1.5億、慢性遷延性肝炎約2500萬、慢性活動性肝炎約1000萬、重癥肝炎約150萬、肝硬化約100萬和肝癌16～30萬。肝硬化和肝癌80%以上是由乙肝病毒引起，而且80%左
【摘要】基因工程在診
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