發(fā)布時間：2021-09-28所屬分類：醫(yī)學(xué)論文瀏覽：1次
摘 要： 摘要:目的建立同時測定頸舒顆粒中三七皂苷R1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re含量的超高效液相色譜法。方法色譜柱為WatersBEHC18柱(50mm2.1mm，1.7m)，流動相為乙腈-水(梯度洗脫)，流速為0.6mL/min，檢測波長為203nm，柱溫為30℃，進(jìn)樣量為1L。結(jié)果三
摘要:目的建立同時測定頸舒顆粒中三七皂苷R1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re含量的超高效液相色譜法。方法色譜柱為WatersBEHC18柱(50mm×2.1mm，1.7μm)，流動相為乙腈-水(梯度洗脫)，流速為0.6mL/min，檢測波長為203nm，柱溫為30℃，進(jìn)樣量為1μL。結(jié)果三七皂苷Rb1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re在各自含量范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好(r≥0.9991，n=7);精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD均小于2%;平均回收率分別為101.23%，101.36%，100.29%，99.31%，RSD分別為1.25%，1.32%，0.89%，1.34%(n=6)。結(jié)論該方法操作快速簡便，專屬性強(qiáng)，重復(fù)性好，準(zhǔn)確度較高，可用于頸舒顆粒中三七皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re4種成分的含量測定。
關(guān)鍵詞:頸舒顆粒;超高效液相色譜法;皂苷類成分;含量測定
頸舒顆粒由三七、川芎、當(dāng)歸、紅花、肉桂、天麻、人工牛黃7味中藥組方[1]，具有活血化瘀、溫經(jīng)通竅止痛功效，治療頸椎病效果較好[2-4]。方中三七為君藥，功能散瘀止血、消腫定痛，用于治療出血、瘀滯腫痛、跌打損傷、胸腹刺痛等癥。2015年版《中國藥典(一部)》收載的頸舒顆粒[1]，含量測定項(xiàng)下僅對三七中人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1成分進(jìn)行指標(biāo)控制。超高效液相色譜(UPLC)法靈敏度高，分離效果好，檢測快速，可快捷、全面控制頸舒顆粒中三七的質(zhì)量。本研究中采用UPLC法同時測定頸舒顆粒中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re和人參皂苷Rb1的含量[5-9]，可為該制劑的檢測、開發(fā)及質(zhì)量控制提供參考。現(xiàn)報道如下。
1儀器與試藥
1.1儀器
WatersACQUITYClasss型超高效液相色譜儀(美國Waters公司);Agilent1260型高效液相色譜儀(美國Agilent公司);PS-G60A型超聲波清洗機(jī)(東莞市潔康超聲波設(shè)備有限公司，功率為360W，頻率為40kHz);ATSmol1850C型超純水機(jī)(天津市泰斯特儀器有限公司);MSE3.6P-OCE-DM型電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器<北京>有限公司，精度為百萬分之一);AY120型電子天平(日本島津公司，精度為萬分之一)。
1.2試藥
頸舒顆粒(國藥集團(tuán)精方<安徽>藥業(yè)股份有限公司，批號分別為200212，200403，191206);三七皂苷R1對照品(批號為110745-201921，純度為93.1%)，人參皂苷Rb1對照品(批號為110704-201827，純度為93.1%)，人參皂苷Rg1對照品(批號為110703-201933，純度為93.4%)，人參皂苷Re對照品(批號為110754-201827，純度為93.4%)，均購于中國食品藥品檢定研究院;肉桂(批號為170501)，當(dāng)歸(批號為190403)，紅花(批號為190701)，天麻(批號為180601)，川芎(批號為190401)，均購于貴州達(dá)靈藥業(yè)有限公司;人工牛黃(四川菲德力制藥有限公司，批號為170101);乙醚、甲醇為分析純，乙腈為色譜純，均購于美國Tedia試劑公司;水為超純水。
2方法與結(jié)果
2.1色譜條件
色譜柱:WatersBEHC18柱(50mm×2.1mm，1.7μm);流動相:乙腈(A)-水(B)，梯度洗脫(洗脫程序見表1);流速:0.6mL/min;檢測波長:203nm;柱溫:30℃;進(jìn)樣量:1μL。
2.2溶液制備
分別取三七皂苷R1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1及人參皂苷Re對照品2.281，2.737，4.103，1.220mg，精密稱定，置同一10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得混合對照品溶液。取樣品(批號為200212)1.0g，混勻，研細(xì)，精密稱定，置索氏提取器中，加乙醚適量，水浴微沸回流提取1h，濾過，濾紙及藥渣揮干后置同一具塞錐形瓶中，加甲醇20mL，超聲處理30min，濾過，取甲醇20mL，分2次洗滌濾渣，濾液置同一蒸發(fā)皿中，蒸干，加水20mL使殘?jiān)芙猓盟柡偷恼〈颊駬u提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙猓⒍ㄈ葜?0mL容量瓶中，搖勻，濾過，即得供試品溶液。取肉桂、當(dāng)歸、紅花、天麻、川芎、人工牛黃，按頸舒顆粒處方及制備工藝煎煮、濃縮制成陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。
2.3方法學(xué)考察
專屬性試驗(yàn):取2.2項(xiàng)下混合對照品溶液、供試品溶液、空白溶劑(甲醇)及陰性對照品溶液適量，按2.1項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣分析，色譜圖見圖1。結(jié)果供試品溶液4個主成分色譜峰與混合對照品溶液的4個主成分色譜峰保留時間一致，且在10min內(nèi)完全分離，分離度均大于1.5，陰性對照無干擾。
線性關(guān)系考察:分別精密量取2.2項(xiàng)下混合對照品溶液0.1，0.3，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5μL，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)、各化學(xué)成分含量(X，μg)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果見表2。
精密度試驗(yàn):精密量取2.2項(xiàng)下混合對照品溶液適量，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定6次。結(jié)果三七皂苷R1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re峰面積的RSD分別為0.29%，0.63%，0.12%，0.83%(n=6)，表明儀器精密度良好。
穩(wěn)定性試驗(yàn):精密量取2.2項(xiàng)下供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件分別于0，4，6，8，12，16，24h時進(jìn)樣測定。結(jié)果三七皂苷R1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re峰面積的RSD分別為1.08%，1.44%，0.96%，1.87%(n=7)，表明供試品溶液中4種皂苷成分在室溫下24h內(nèi)穩(wěn)定。
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重復(fù)性試驗(yàn):取樣品(批號為200212)適量，精密稱定，共5份，依法制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定。結(jié)果三七皂苷R1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re峰面積的RSD分別為0.34%，0.41%，0.19%，0.84%(n=5)，表明方法重復(fù)性良好。
加樣回收試驗(yàn):取已知含量的樣品(批號為200212)1.0g，精密稱定，共6份，加入混合對照品溶液(三七皂苷R10.406mg/mL、人參皂苷Rg10.907mg/mL、人參皂苷Re0.229mg/mL、人參皂苷Rb10.466mg/mL)3mL，依法制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表3。
2.4高效液相色譜(HPLC)法比較
取2.2項(xiàng)下混合對照品溶液和供試品溶液，按頸舒顆粒含量測定三七項(xiàng)下的色譜條件[1]進(jìn)樣分析。色譜柱采用CAPCELLPAKC18柱(250mm×4.6mm，3μm)。結(jié)果供試品溶液中4個主成分色譜峰與混合對照品溶液中4個主成分色譜峰保留時間一致，且在70min內(nèi)完全分離，分離度均大于1.5。色譜圖見圖2。
2.5樣品中皂苷類成分含量測定
取樣品3批(批號分別為200212，191206，200403)，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下和2.4項(xiàng)下色譜條件測定樣品中4種皂苷類成分的含量，再與2015年版《中國藥典(一部)》頸舒顆粒三七含量測定項(xiàng)下的色譜條件和供試品溶液前處理方法測定結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果見表4。
3討論
原標(biāo)準(zhǔn)中乙醚脫脂靜置12h時間過長。參考文獻(xiàn)[10-16]，曾對比乙醚靜置、超聲和加熱回流脫脂后甲醇提取方法，綜合考慮采用甲醇超聲處理。結(jié)果人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1的提取效率均高于2015年版《中國藥典(一部)》頸舒顆粒三七含量測定項(xiàng)下的樣品前處理方法。
用甲醇超聲提取后直接進(jìn)樣分析，在三七皂苷R1峰處和人參皂苷Rb1峰處雜質(zhì)峰太多，影響分離度。將甲醇提取液蒸干，加水溶解，再用水飽和正丁醇提取，蒸干，甲醇溶解后進(jìn)樣分析。結(jié)果在三七皂苷R1峰處和人參皂苷Rb1峰處雜質(zhì)峰均減少，達(dá)到完全分離(R>1.5)。
HPLC法和UPLC法同時測定頸舒顆粒的含量，結(jié)果各成分測定值的RSD均小于1.5%，故可用UPLC法代替HPLC法測定頸舒顆粒中4種皂苷類成分的含量。
參考文獻(xiàn)[1]中的方法，人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1完全分離至少需要70min，采用UPLC法在10min內(nèi)就可同時完全分離人參皂苷Rg1、三七皂苷R1、人參皂苷Rb1和人參皂苷Re4種成分，比原標(biāo)準(zhǔn)增加2個皂苷類成分的質(zhì)量控制，同時極大地縮短了分析時間，減少了試藥的用量。——論文作者：李天佑，何羽△
