發(fā)布時間：2020-04-11所屬分類：醫(yī)學(xué)論文瀏覽：1次
摘 要： 摘要：目的探討urocortin(UCN)對胃腸功能和血漿ghrelin水平的影響及參與介導(dǎo)的受體。方法運用免疫熒光法和ELISA法，觀察8周齡SD雄性大鼠側(cè)腦室單純注射UCN或同時注射UCN和促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子(CRF)受體拮抗劑后，大鼠攝食量、胃排空速度、血漿酰化和非
摘要：目的探討urocortin(UCN)對胃腸功能和血漿ghrelin水平的影響及參與介導(dǎo)的受體。方法運用免疫熒光法和ELISA法，觀察8周齡SD雄性大鼠側(cè)腦室單純注射UCN或同時注射UCN和促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子(CRF)受體拮抗劑后，大鼠攝食量、胃排空速度、血漿酰化和非酰化ghrelin水平的變化。結(jié)果①側(cè)腦室注射UCN后，觀察的各項指標(biāo)均顯著降低(P<0.05)。②側(cè)腦室同時注射UCN+CRF.1型受體拮抗劑，各項指標(biāo)與單純注射UCN相比，無明顯差異(P>0.05);側(cè)腦室同時注射UCN+CRF-2型受體拈抗劑，各項指標(biāo)與單純注射UCN相比，均有明顯增加(P<0.05)。結(jié)論推測UCN經(jīng)側(cè)腦室注射后能與CRF一2型受體結(jié)合，從而抑制胃腸功能并降低血漿酰化和非酰化ghrelin水平。
關(guān)鍵詞：urocortin;ghrelin;胃腸功能;促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子受體
隨著工作與生活節(jié)奏的加快以及競爭的日趨激烈，人們的生活壓力越來越大。壓力事件會引發(fā)機體的應(yīng)激反應(yīng)，并會導(dǎo)致厭食癥、功能性消化不良、腸易激綜合征等，但機制尚未明確。
相關(guān)期刊推薦：《山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報》Journal of Shanxi Medical University(月刊)曾用刊名：山西醫(yī)學(xué)院學(xué)報，1959年創(chuàng)刊，醫(yī)學(xué)類綜合性學(xué)術(shù)刊物，主要刊登基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)、預(yù)防醫(yī)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)方面的科研成果及工作經(jīng)驗。
Urocortin(UCN)系促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子(CRF)家族的一員，與CRF一1型受體和CRF-2型受體都能結(jié)合，且與CRF-2型受體的結(jié)合能力更高…。研究表明，urocortin與應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)，并會導(dǎo)致抑郁、行為減少、食欲降低、攝食抑制等，但機制尚未明確J。
Ghrelin是由28個氨基酸組成的肽類激素，主要由胃黏膜泌酸腺X/A樣細胞分泌，其活性形式——酰化ghrelin可以使食欲增強、胃腸運動加快、胃酸分泌增多J。研究表明，自主神經(jīng)系統(tǒng)和與應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)的激素都會影響血漿酰化ghrelin的水平。
本研究旨在通過研究側(cè)腦室注射UCN對血漿ghrelin水平和胃腸功能的影響及參與介導(dǎo)的受體，來探討壓力事件導(dǎo)致食欲降低、攝食抑制、胃腸功能失調(diào)的可能性原因。
1材料和方法
1.1動物和材料8周齡SD雄性大鼠96只，體重210—230g，自由攝食、飲水，動物房溫度維持在(22±2)cC，光暗周期為12h：12h。UCN購自日本PeptideInstitute，CRF.1型受體和CRF.2型受體購自日本W(wǎng)akoPureChemicalIndustries。UCN，CRF一1，2型受體拮抗劑均以PBS(pH6.9)為溶劑。
1.2分組和方法
1.2.1分組在觀察攝食量、胃排空速度、血漿酰化和非酰化ghrelin水平這三項實驗中，每項實驗均隨機選取4組大鼠(n=8)，大鼠分別側(cè)腦室注射PBS(pH6.9)、UCN(0.3nmol/101)、UCN(0.3nmol/51)十CRF.1型受體拮抗劑(12nmo~5tx1)的混合液、UCN(0.3nmo~5Ix1)+CRF-2型受體拮抗劑(2nmoV51)的混合液。每只大鼠注射試劑總量均為10LL1。
1.2.2動物模型隨機挑選正常大鼠進行實驗。將動物腹膜腔內(nèi)注射戊巴比妥鈉麻醉后，在大鼠腦立體定位儀上固定，使前后囟處于同一水平面上L5]。沿顱頂正中剪開頭皮暴露顱骨，確定側(cè)腦室位置。在顱骨相應(yīng)部位開一小孔，將不銹鋼套管置于腦室內(nèi)。將套管固定于顱骨上，并用一不銹鋼管芯針插入套管內(nèi)，防止套管堵塞。手術(shù)后大鼠單籠飼養(yǎng)，至少恢復(fù)5d。恢復(fù)期間，盡量減少壓力、靜脈注射等刺激。試驗前禁食24h。
1.2.3大鼠攝食量的測定側(cè)腦室注射后，給每組大鼠提供等量食物，并在1，2，4，6h后記錄每只大鼠的攝食量，取平均值。
1.2.4大鼠胃排空速度的測定將熒光素FD70標(biāo)記的右旋糖酐(每鼠12.5mg熒光素FD70/0.5ml右旋糖酐)作為不被消化道吸收的標(biāo)記物。側(cè)腦室注射30min后讓大鼠口服。口服30min后，無痛處死大鼠，立即摘除其胃部。在5mlPBS中收集FD70標(biāo)記的胃內(nèi)容物。用0.45Ixm的濾波器過濾上清液，使用UV.1200分光光度計在490nm和520nm的波長中測量吸光率。胃排空率(%)=(1一A/B)×100%，A代表殘留在胃內(nèi)的FD70數(shù)量，B代JShanxiMedUniv，Jul2012，Vol43No7表服用總劑量。
1.2.5血漿酰化和非酰化ghrelin水平的測定側(cè)腦室注射后，無痛處死大鼠，從大鼠的眶靜脈竇采集約4ml全血裝入含有乙二胺四乙酸(5.0mg)和抑肽酶(2000klU)的EP管內(nèi)。放置4cI=離心機中，10000×g離心3min并取上清，用1mol//LHC1酸化后放于一80c【=冰箱中儲存待測。采用ELISA方法檢測血漿中g(shù)hrelin。
1.3統(tǒng)計學(xué)分析將原始數(shù)據(jù)在Excel下建立數(shù)據(jù)庫，應(yīng)用SPSS11.5軟件進行處理。采用兩樣本均數(shù)t檢驗，檢驗水準(zhǔn)取=0.05，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
2結(jié)果
2.1UCN在CRF受體拮抗劑作用下對攝食量、胃排空的影響側(cè)腦室注射UCN(0.3nmo~lO1)后，與PBS組相比，1，2，4，6h的累計攝食量均顯著減少(P<0.05)，說明UCN能夠抑制攝食。側(cè)腦室同時注射UCN+CRF.1型受體拮抗劑后，1，2，4，6h的累計攝食量與單純注射UCN組差異不大(P>0.05)，說明CRF.1型受體拮抗劑不能改善UCN導(dǎo)致的攝食量減少。側(cè)腦室注射UCN+CRF一2型受體拮抗劑后，1，2，4，6h的累計攝食量與單純注射UCN組相比明顯增加(P<0.05，見表1)，說明CRF一2型受體拮抗劑能改善UCN導(dǎo)致的攝食量減少。
側(cè)腦室注射UCN(O.3nmo~101)后，攝食后30min胃排空率與PBS組比較，顯著下降(P<0.05)，說明UCN能夠減慢胃排空速度。側(cè)腦室同時注射UCN+CRF.1型受體拮抗劑后，攝食后30min胃排空率與單純注射UCN組差異不大(P>0.05)，說明CRF一1型受體拮抗劑不能改善UCN導(dǎo)致的胃排空速度減慢。側(cè)腦室注射UCN+CRF.2型受體拮抗劑后，攝食后30min胃排空率與單純注射UCN組相比明顯增加(P<0.05，見表2)，說明CRF一2型受體拮抗劑能改善UCN導(dǎo)致的胃排空速度減慢。.
2.2UCN在CRF受體拮抗劑作用下對血漿ghrelin水平影響側(cè)腦室注射UCN(0.3nmol/101)1h后，血漿酰化和非酰化ghrelin水平均有顯著降低，說明UCN能夠降低血漿酰化和非酰化ghrelin水平。側(cè)腦室同時注射UCN+CRF.1型受體拮抗劑后，血漿酰化和非酰化ghrelin水平與單純注射UCN組差異不大，說明CRF.1型受體拮抗劑不能改善UCN導(dǎo)致的血漿酰化和非酰化ghrelin水平降低。側(cè)腦室注射UCN+CRF-2型受體拮抗劑后，血漿酰化和非酰化ghrelin水平與單純注射UCN組相比明顯升高，說明CRF一2型受體拮抗劑能改善UCN導(dǎo)致的血漿酰化和非酰化ghrelin水平降低(P<0.05，見表3)。
3討論
Ghrelin是由28個氨基酸組成的肽類激素，主要由胃黏膜泌酸腺X/A樣細胞合成后分泌入血，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)等部位中也有少量的合成。胃切除術(shù)患者血漿ghrelin水平大大降低。大鼠X/A樣細胞有兩種類型：關(guān)閉型和開放型。其中有活性的酰化ghrelin由關(guān)閉型細胞分泌，無活性的非酰化ghrelin兩種細胞均可分泌。酰化ghrelin是生長激素促分泌素受體(GHS—R)的內(nèi)源性配體，它的作用很廣泛，不僅可以刺激垂體生長激素釋放，還可以使食欲增強、胃腸運動加快、胃酸分泌增多，并參與能量代謝、心血管活動、免疫系統(tǒng)功能的調(diào)節(jié)。研究表明，自主神經(jīng)系統(tǒng)和與應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)的激素都會影響血漿酰化ghrelin的水平。
Uroco~in是CRF家族的一員，存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，身體其他部位也有分布。其中的Urocortin(UCN)與CRF.1型受體和CRF一2型受體都有高度的親和力，與CRF.2型受體的親和力是CRF.1型受體的40倍。CRF-2型受體在中樞和外周均有表達。以往研究表明，UCN可通過與CRF-2型受體結(jié)合發(fā)揮心血管作用，有可能用于治療冠心病、高血壓、充血性心衰、心肌梗死等心血管疾病¨。UCN還與應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)。另有研究表明，UCN參與食欲降低、抑郁、攝食抑制等的發(fā)生，但其機制尚未明確。
本項研究表明，側(cè)腦室注射UCN后，攝食量、胃排空速度均有顯著抑制，血漿中酰化和非酰化ghrelin水平也有顯著降低，而有活性的酰化ghrelin有增強食欲、加快胃腸運動、增加胃酸分泌的作用。可以推測：UCN使血漿中酰化和非酰化ghrelin水平降低，并導(dǎo)致攝食抑制、胃腸功能失調(diào)，后兩者可能有一定的關(guān)系。
通過使用CRF.1型受體和CRF一2型受體拮抗劑，發(fā)現(xiàn)CRF一2型受體拮抗劑可修復(fù)由UCN導(dǎo)致的血漿中酰化和非酰化ghrelin水平降低和攝食抑制、胃腸功能失調(diào)等癥狀，但CRF一1型受體拮抗劑卻不能。故推測：側(cè)腦室注射UCN發(fā)揮以上作用可能是由cRF_2型受體介導(dǎo)的。
綜上，可以得出結(jié)論：UCN經(jīng)側(cè)腦室注射后能與CRF一2型受體結(jié)合，從而抑制胃腸功能并降低血漿酰化和非酰化ghrelin水平。由于壓力事件會引發(fā)機體的應(yīng)激反應(yīng)，而應(yīng)激反應(yīng)可使中樞神經(jīng)系統(tǒng)對UCN的表達增強J，因此可以推測：壓力事件導(dǎo)致的厭食癥、胃腸功能失調(diào)等癥狀可能與UCN有關(guān)。
