發布時間：2020-04-08所屬分類：醫學論文瀏覽：1次
摘 要： 摘要目的：研究腎含鈣結晶鹽形成與維生素D受體(VDR)基因啟動子FokI位點單核苷酸多態性(SNP)之間的關系。方法：根據超聲檢查進行分組：8O例腎皮質含鈣結晶鹽形成患者(A組)及8O例無結晶鹽形成者(B組)。應用聚合酶鏈反應一限制性片段長度多態性(PCR.RFLP)對兩組
摘要目的：研究腎含鈣結晶鹽形成與維生素D受體(VDR)基因啟動子FokI位點單核苷酸多態性(SNP)之間的關系。方法：根據超聲檢查進行分組：8O例腎皮質含鈣結晶鹽形成患者(A組)及8O例無結晶鹽形成者(B組)。應用聚合酶鏈反應一限制性片段長度多態性(PCR.RFLP)對兩組進行FokI多態性檢測。分析兩組間基因型和等位基因的分布情況。結果：A組基因型分布FF：30%(24/80)。Ff：50%(40/80)，f：20%(16/80);B組FF：34%(27/80)，Ff：60%(48/80)，f：6%(5/80);其中ff分布在兩組中差異有統計學意義(P<0.05)。A、B兩組F等位基因頻率分布分別為55%(88/160)和64%(102/160);f分別為45%(72/160)和36%(58/160)，差異均無統計學意義(均P>0.05)。結論：VDR基因起始密碼子中FokI多態性與腎皮質含鈣結晶鹽形成有關系，超聲作為一種無創簡便的早期診斷方法在本研究中有著較重要的作用。
關鍵詞維生素D;受體;超聲檢查;多態性;結晶鹽;腎
含鈣結晶鹽的形成可能是導致泌尿系統結石發生的重要條件之一，維生素D受體(vitaminDreceptor，VDR)在鈣的代謝中起著重要的作用[。VDR基因啟動子上存在有FokI位點單核苷酸多態性(singlenucleotidepolymorphism，SNP)。該SNP對尿鈣濃度有一定的影響E2]。超聲是一種無創、簡便經濟的早期診斷腎結晶鹽的方法，我們通過超聲檢測腎皮質含鈣結晶鹽的形成，并分析結晶鹽與VDR基因啟動子SNP的關系，為研究泌尿系結石發生的原因提供一定的參考。
1對象與方法
1.1研究對象收集2009年8月至2011年3月在本科檢查的腎皮質含鈣結晶鹽患者80例作為觀察組(A組)，其中男52例，女28例，雙側10例，單側70例，年齡23～57歲，平均(37.09±9.07)歲。同時收集8O例無腎實質結晶鹽形成者作為對照組(B組)，其中男58例，女22例，年齡21～56歲，平均(38.78-4-8.89)歲。兩組均無泌尿系統感染。排除泌尿系腫瘤及尿路梗阻，兩組年齡性別差異無統計學意義(P>0.05)。本研究經本院倫理委員會批準。參試者均簽署知情同意書。
1.2方法與儀器
1.2.1腎皮質含鈣結晶鹽的檢查兩組人群均行常規泌尿系統超聲檢查。超聲診斷儀機型為SIEMENS.Antares、ALOKA5000.探頭頻率3—6MHz.受檢者取仰臥位及側臥位。經側腰部行冠狀切面觀察腎皮質結晶鹽.有需要時經背部行腎縱切面掃查，也可囑患者深吸氣.沿12肋骨下緣掃查顯示受肋骨遮擋部腎臟。結晶鹽超聲診斷為腎皮質內強回聲無聲影及后方伴不同程度彗星尾征，并排除部分弓形動脈鈣化、腎鈣乳囊腫、腎實質小囊腫、腎鈣質沉著等容易混淆的異常聲像圖，由兩位高年資超聲科醫師做出判斷。
1.2.2DNA的提取抽取實驗對象肘靜脈血2mL，經EDTA抗凝.采用TIANampGenomicDNAKit試劑盒(深圳晶美)提取基因組。
1.2.3PCR擴增通過GenBank檢索到VDR基因序列『gi：29745161]，Genefisher設計引物：上游5ACTGACTCTGGCTCTGAC3：下游5CACCTTGCTFCTFCTCCC3，引物合成由深圳晶美公司完成。擴增VDR包含起始密碼FokI的DNA片段，預期產物片段246bp。PCR反應體系：反應總體積為50L，含2L模板DNA，8L上、下游引物，2LdNTPs，0.7LTaqDNA聚合酶和相應的緩沖液。反應條件為：預變性96~C8min.94℃45S.52℃146360s，72℃30s，共4O個循環。72℃延伸10min。
1.2.4PCR。RFLP分析多態性對起始密碼多態位進行PCR擴增后，取10PCR產物加入限制性內切酶FokI(深圳晶美)0.5L及10×buffer1L，牛血清白蛋白1L，DNA7.5L，總反應體系20，37℃酶切，2%的瓊脂糖凝膠對酶切產物電泳，自動凝膠成像儀成像，檢測基因型。
1.3統計學方法采用SPSS17.0分析軟件進行統計分析。組間VDR基因型分布(計數資料)概率比較采用)(檢驗。
2結果
2.1腎皮質含鈣結晶鹽超聲影像圖見圖1。
2.2基因型的PCR.RFLP分析見圖2。
2.3VDR基因FokI多態性以及等位基因在兩組中的分布ff基因型在兩組問的分布差異有統計學意義(P<0.05)，而FF和FT基因在兩組間分布的差異無統計學意義(P>0.05)。F以及f基因頻率兩組間比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。
3討論
泌尿系結石形成機制目前尚不明確.絕大多數結石成分中都含有鈣。所以高鈣尿是含鈣結石形成的重要原因之一[。孫建濤等[]通過動物實驗研究發現，高草酸尿可導致腎小管內草酸鹽結晶沉積，合并梗阻后，會造出沉積加重。盧少明等_6]發現雄性激素會導致雄鼠內腎結晶鹽的形成，當結晶鹽沉積于腎臟，聲像圖即可表現異常，主要在腎皮質集合管沉積，隨著病程進一步發展，腎髓質或乳頭處出現尿酸鹽結晶。多數結晶鹽特點是x線不顯影[.超聲可以顯示不透光的結晶鹽及結石.原發性腎結石形成過程中。在不存在梗阻的條件下，含鈣結晶鹽的形成可能在腎實質。超聲檢查作為一種無創，方便，經濟的檢查方式，相比x線檢查具有無射線，敏感性高等優勢。
目前已經發現的VDR基因上存在的基因多態性位點有BsmI、TaqI、FokI等位點，其中FokI位于啟動子上E8-9]，啟動子結構的改變對基因的表達會產生重要的調節作用，進而影響VDR的生物學功能。目前較多文獻研究飲食因素與腎實質內含鈣結晶鹽形成的相關性，王軍等[-o]研究發現，蘇子油可以使腎草酸鈣結晶形成明顯減少。已有研究分析VDR基因多態性與尿鈣濃度有一定的相關性…]。但VDR的基因改變是否影響腎實質中含鈣結晶鹽的形成，有無相關性，目前尚無相關研究。
本研究運用超聲檢測早期腎皮質結晶鹽的形成.并通過PCR—RFLP方法檢測VDR基因啟動子上存在的FokI基因SNP。分析其與。腎皮質含鈣結晶鹽形成的關系。我們發現觀察組中ff基因型例數明顯高于對照組，說明ff基因型與腎皮質含鈣結晶鹽的形成有一定的相關性，攜帶ff基因型人群較其他兩類基因人群可能更容易發生腎皮質含實用醫學雜志2012年第28卷第9期鈣結晶鹽的形成。
本實驗結果表明VDR基因啟動子上存在的FokISNP與人體的腎皮質含鈣結晶鹽形成之間存在一定關系，ff基因型可以作為導致結晶鹽形成的基因標記物之一，腎皮質含鈣結晶鹽是否最終發展為結石，尚有待進一步研究。超聲作為一種無創方便的檢查手段可以作為腎結石早期診斷和追蹤的方法并為結石二級預防提供重要的參考信息。
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