發(fā)布時(shí)間：2013-09-12所屬分類：醫(yī)學(xué)論文瀏覽：1次
摘 要： 目的：采用高效液相色譜法測(cè)定保胎靈片中芍藥苷的含量。方法：KromasilC18(4.6mm×250mm，5μm)色譜柱;流動(dòng)相為乙腈-水(10:90);檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm;柱溫為40℃;流速為1.0ml·min-1。結(jié)果：芍藥苷進(jìn)樣量在0.1572μg～0.7860范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程Y=980
【摘要】 目的：采用高效液相色譜法測(cè)定保胎靈片中芍藥苷的含量。方法：KromasilC18(4.6mm×250mm，5μm)色譜柱;流動(dòng)相為乙腈-水(10:90);檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm;柱溫為40℃;流速為1.0ml·min-1。結(jié)果：芍藥苷進(jìn)樣量在0.1572μg～0.7860范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程Y=98073.5000X-17548.2000(r=0.9998)。平均回收率為100.04%，RSD為0.7%。結(jié)論：本方法簡(jiǎn)便、快速、靈敏、準(zhǔn)確，可為今后修訂該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。
【關(guān)鍵詞】 保胎靈片 芍藥苷 HPLC法 含量測(cè)定
Determination of the Contene of Baotai LingTableta by HPLC
【Abstract Objective】To establish a HPLC method for determination of the content for Paeoniflorin of Baotai Ling Tableta. Method: A Kromasil C18 column(250mm×4.6mm,5μm) was uesd.and temperature was set at 40℃.The mobile phase consisted of Acetonitrile —Water(10:90),with flow rate of 1.0ml·min-1.The UV detection wavelength was set at230nm.Results:The calibration curves of the Paeoniflorin were linear in the range of 0.1572μg～0.7860μg (r = 0.9998). Conclusion:This method apears to be simple,rapid,sensitive and accurate.
【Key words】Baotai Ling Tableta; Paeoniflorin; HPLC;content determination.
保胎靈片是一種補(bǔ)腎、固沖、安胎的純中藥制劑，用于先兆流產(chǎn)、習(xí)慣性流產(chǎn)及因流產(chǎn)引起的不孕癥。對(duì)長(zhǎng)期不孕或流產(chǎn)后不孕者有促進(jìn)妊娠作用，同時(shí)有增強(qiáng)機(jī)體免疫力和促進(jìn)胎兒發(fā)育的功效，無(wú)毒副作用，宜長(zhǎng)期服用。其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《衛(wèi)生部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第四冊(cè)》，該標(biāo)準(zhǔn)只有顯微鑒別，沒(méi)有含量測(cè)定，本文采用高效液相色譜法對(duì)其處方中的白芍的主要成分芍藥苷進(jìn)行了定量分析，取得了滿意的結(jié)果。
1 實(shí)驗(yàn)材料
1.1 儀器 LC-2010AHT高效液相色譜儀(日本島津制作所);AE240型電子天平(瑞士梅特勒);KQ-400KDB型高功率數(shù)控超聲波清洗器(功率：400W，昆山市超聲儀器有限公司)。
1.2 藥品和試劑 芍藥苷(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：110736-200628，供含量測(cè)定用);保胎靈片(吉林國(guó)藥制藥有限責(zé)任公司，批號(hào)：20070701;吉林紫鑫藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：060101，051002);純化水(經(jīng)檢測(cè)合格)，乙醇為分析純，乙腈為色譜純。
2 方法與結(jié)論
2.1 色譜條件 色譜柱：KromasilC18(4.6mm×250mm，5μm);流動(dòng)相：乙腈-水(10:90);檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm;柱溫：40℃;流速：1.0ml·min-1，進(jìn)樣量：10μl;理論板數(shù)按芍藥苷計(jì)應(yīng)不低于2000。
2.2 對(duì)照品溶液的制備
2.2.1 對(duì)照品貯備液 精密稱取減壓干燥的芍藥苷對(duì)照品10mg置25ml量瓶中加甲醇溶解并稀釋至刻度，即得芍藥苷對(duì)照品濃溶液。
2.2.2 對(duì)照品溶液 精密量取對(duì)照品貯備液1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即得。
2.3 供試品溶液的制備 取本品20片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取約1.0g，精密稱定，置具塞三角燒瓶中，精密加入30%乙醇溶液25ml，稱定重量，超
聲處理(功率250W，頻率40KHz)30分鐘，放冷，稱定重量，用溶劑補(bǔ)足減失重量，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
2.4 空白溶液的制備 取按處方比例制備但不含白芍的自制空白制劑，再按2.3項(xiàng)下的制備方法制成空白對(duì)照樣品溶液。
2.5 線性關(guān)系考察 精密吸取2.2.1項(xiàng)下的對(duì)照品貯備液2ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度搖勻，分別精密吸取2、4、6、8、10μl，注入色譜儀進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖，以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，求得回歸方程為：Y=98073.5000X-17548.2000(r=0.9998)，結(jié)果表明，芍藥苷進(jìn)樣量在0.1572～0.7860μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。
2.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取2.3項(xiàng)下供試品溶液10μl，注入色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定芍藥苷的色譜峰面積值分別為655076、658269、658663、658001、659049、655389，RSD為0.3%，結(jié)果表明本方法的精密度良好。
2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取2.3項(xiàng)下供試品溶液10μl，注入色譜儀，按0、2、4、8、12、24h間隔進(jìn)樣，測(cè)得芍藥苷的色譜峰面積分別為677758、681397、683901、677074、681217、678807，RSD為0.4%。結(jié)果表明，供試品溶液在室溫條件下24h內(nèi)基本穩(wěn)定。
2.8 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn) 取同一供試品，按2.3項(xiàng)下的方法平行制備6份供試品溶液并依法測(cè)定，結(jié)果每片含芍藥苷分別為0.5075、0.5124、0.5025、0.5169、0.5043，RSD為1.2%，結(jié)果表明本法重現(xiàn)性良好。
2.9 陰性對(duì)照試驗(yàn) 精密吸取溶劑、空白樣品溶液、供試品溶液和對(duì)照品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀測(cè)定。結(jié)果在空白樣品色譜圖中，在與芍藥苷對(duì)照品峰相同的保留時(shí)間處無(wú)吸收峰。
HPLC色譜圖(A陰性樣品;B對(duì)照品;C保胎靈片樣品)
2.10 加樣回收率試驗(yàn) 取已知芍藥苷含量的供試品(060101 吉林紫鑫藥業(yè)股份有限公司，含量為0.5076mg/片)保胎靈20片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，精密稱取6份，取量減半，分別精密加入對(duì)照品溶液(0.393mg/ml)1.9ml，再按2.3項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，并依法測(cè)定，記錄色譜峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算出芍藥苷的平均回收率(n=6)100.04%，RSD=0.7%。
2.11 樣品測(cè)定 取2.2.2項(xiàng)下的對(duì)照品溶液和供試品(吉林國(guó)藥制藥有限責(zé)任公司 20070701;吉林紫鑫藥業(yè)股份有限公司 060101;吉林紫鑫藥業(yè)股份有限公司 051002)溶液各10μl進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積按外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果3批樣品每片芍藥苷的平均含量分別為0.4081、0.4988、0.5525，RSD分別為0.40%、0.87%、0.54%。
3 討論
3.1 在對(duì)供試品提取溶劑的選擇中，我們采用了70%、50%和30%的乙醇溶液，結(jié)果用70%乙醇提取后，提取液的脂溶性雜質(zhì)多，純化處理困難;而50%和30%乙醇的提取液，濾過(guò)后直接進(jìn)樣，即可得到較好的分離效果。同時(shí)，二者測(cè)得的結(jié)果沒(méi)有明顯的差異，鑒于從經(jīng)濟(jì)上考慮，我們采用了30%乙醇為提取溶劑。
3.2 在提取方法的選擇中，采取超聲提取和水浴回流提取兩種方法做對(duì)比，二者測(cè)得的結(jié)果沒(méi)有明顯的差異，但從簡(jiǎn)便和節(jié)能上考慮，采用超聲處理法提取。
3.3 在流動(dòng)相選擇中，采取三種洗脫系統(tǒng)，即乙腈-水(10:90)、甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液(2: 13:85)和乙腈-0.1%磷酸二氫鉀溶液(10:90)。結(jié)果采用乙腈-水(10:90)為流動(dòng)相，峰形與分離效果最好，所以予以采用，而后二者拖尾嚴(yán)重，故未采用。
3.4 色譜柱的選擇對(duì)該試驗(yàn)影響較大，尤其對(duì)色譜峰的拖尾因子的影響更突出。
