發(fā)布時間：2014-06-06所屬分類：醫(yī)學(xué)職稱論文瀏覽：1次
摘 要： 論文摘要：隨著人們生活方式的改變和診斷水平的提高，我國前列腺癌發(fā)病率呈上升趨勢。臨床上通常采用血清前列腺特異性抗原(PSA)檢測和穿刺活檢病理檢查進行確診，但對早期微小病灶的預(yù)測能力較弱，因此需要一個新的分子標志物來對早期前列腺癌進行早期診斷是
論文摘要：隨著人們生活方式的改變和診斷水平的提高，我國前列腺癌發(fā)病率呈上升趨勢。臨床上通常采用血清前列腺特異性抗原(PSA)檢測和穿刺活檢病理檢查進行確診，但對早期微小病灶的預(yù)測能力較弱，因此需要一個新的分子標志物來對早期前列腺癌進行早期診斷是目前研究的熱點和重點。
關(guān)鍵詞：前列腺癌,蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子,生物學(xué)指標
引言
探討蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子(CIP2A)在前列腺癌中的表達及意義。 方法 選取昆明醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院2009年1月～2012年4月手術(shù)治療的前列腺癌患者65例為試驗組，選取同期昆明醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院收治的良性前列腺增生患者65例組織標本為對照組，采用免疫印跡(Western blot)的方法對兩組CIP2A的表達情況進行比較，并分析CIP2A的表達與臨床病理因素的關(guān)系。 結(jié)果 CIP2A在試驗組中的陽性表達率為64.62%(42/65)，在對照組中陽性表達率為29.23%(19/65)，兩組進行比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.05);所有患者隨訪1年，CIP2A的陽性表達與術(shù)后1年腫瘤轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)、分化程度、臨床分期、術(shù)前血清中PSA水平有關(guān)(P < 0.05)。 結(jié)論 CIP2A有望成為前列腺癌早期診斷、預(yù)測復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移及預(yù)后評價的一個重要的生物學(xué)指標。
前列腺癌是威脅男性健康的一種常見的泌尿生殖系統(tǒng)腫瘤[1]。有資料顯示，前列腺癌在歐美國家的發(fā)病率較高，約為124.8/10萬，我國為1.6/10萬，本研究旨在探討蛋白磷酸酶2A癌性抑制因子(CIP2A)在前列腺癌組織中的表達情況及其與臨床病理之間的關(guān)系，現(xiàn)報道如下：
1 資料與方法
1.1 一般資料
選擇昆明醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院2009年1月～2012年4月手術(shù)治療的前列腺癌患者65例作為試驗組，年齡51～79歲，平均(63.8±6.2)歲，其中42例患者標本來自經(jīng)尿道前列腺電切術(shù)，23例患者經(jīng)穿刺活檢病理證實后行恥骨上前列腺癌根治術(shù);所有患者均未進行放化療及激素和外科去勢治療。選取同期昆明醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院治療的良性前列腺增生患者65例的組織標本作為對照組，年齡52～83歲，平均(63.1±5.8)歲，所有標本是由經(jīng)尿道前列腺電切術(shù)獲得;獲取后標本于15 min內(nèi)-80℃的冰箱內(nèi)保存。標本的分離和使用都分別通過醫(yī)院倫理審查委員會的批準。
1.2 方法
65例前列腺癌標本均采用免疫印跡(Western blot)法進行CIP2A的測定，取前列腺癌組織勻漿，加入裂解液孵育4℃，10 min。以12 000 r/min，4℃，離心10 min，取上清。將蛋白上清溶于5×SDS上樣緩沖液，95℃，水浴10 min，各取上清30 μg進行10% SDS-PAGE電泳。電泳結(jié)束后用濕轉(zhuǎn)法將樣品轉(zhuǎn)移至PVDF膜。將PVDF膜放入含有5% BSA的TBS/T中，4℃包被過夜�？贵w孵育。將膜置于ECL顯色液中，室溫避光孵育1 min。壓片、曝光、顯影。實驗中設(shè)不加一抗的空白對照組，實驗重復(fù)5次。以α-Tubulin作為內(nèi)參。圖像以GS800 Calibrated Densitometer 掃描儀進行灰度掃描。所有標本常規(guī)制作HE染色。HE染色后由2名病理科醫(yī)師共同閱片進行Gleason分級。按照分化程度分為5級即Gleason分級(1～5)分，將腫瘤細胞的主要成分和次要成分別記分，高分化為2～4分，中分化5～6分，亞低分化7分，低分化為8～10分。所有患者入院后抽取血樣本，采用免疫熒光法進行測定PSA，并對所有患者通過門診復(fù)查進行隨訪1年。
1.3 臨床分期標準
根據(jù)Whitmore-Jewett分期標準進行分期：A期：患者無臨床癥狀，僅通過病理檢查發(fā)現(xiàn)癌細胞;B期：腫瘤限于前列腺內(nèi)，伴有臨床表現(xiàn);C期：腫瘤穿透前列腺被膜;D期：出現(xiàn)前列腺癌轉(zhuǎn)移。
1.4 觀察指標
采用半定量方法判讀免疫組織化學(xué)染色結(jié)果。陽性結(jié)果為分布于細胞質(zhì)、細胞膜以及核周的比較鮮明的棕黃色著色，陰性結(jié)果為均一、非特異的較淺的著色。每張切片隨機選取10個高倍視野(400×)，每個視野計數(shù)100個細胞，判斷陽性細胞的染色強度和計數(shù)陽性細胞的百分率。染色強度評分如下：0分為無染色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色;陽性細胞百分率評分如下：1分為≤10%，2分為>10%～30%，3分為>30%～50%，4分為>50%。最終染色結(jié)果取兩者乘積：0分為陰性(-);1～2分為弱陽性(+);3～4分為中等陽性(++);>4分為強陽性(+++)。
1.5 統(tǒng)計學(xué)方法
采用統(tǒng)計軟件SPSS 18.0對數(shù)據(jù)進行分析，正態(tài)分布計量資料以均數(shù)±標準差(x±s)表示。計數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
2 結(jié)果
2.1 CIP2A在試驗組和對照組中的表達情況
CIP2A在試驗組中的陽性表達率為64.62%(42/65)，在對照組中的陽性表達率為29.23%(19/65)，兩組進行比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=16.3388，P < 0.05)。見表1。
表1 CIP2A在試驗組和對照組中的表達情況(例)
注：CIP2A：蛋白磷酸酶2A癌性抑制因子
2.2 前列腺癌組織中CIP2A的表達與臨床病理因素的關(guān)系
所有患者隨訪1年，根據(jù)患者年齡、術(shù)后1年腫瘤轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)、分化程度、臨床分期、術(shù)前血清中PSA水平進行分析，CIP2A的陽性表達與術(shù)后1年腫瘤轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)、分化程度、臨床分期、術(shù)前血清中PSA水平有關(guān)，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.05)。見表2。
表2 前列腺癌組織中CIP2A的表達與臨床病理因素的關(guān)系(例)
注：PSA：前列腺特異性抗原;CIP2A：蛋白磷酸酶2A癌性抑制因子
3 討論
前列腺癌的發(fā)生是一個長期的多步驟多因素的變化過程，是細胞增殖與細胞死亡相互作用的結(jié)果，一旦細胞過度增殖可能導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生，細胞凋亡受抑制能增強惡性病發(fā)生的可能性。
最近研究表明[4-5]，CIP2A是新發(fā)現(xiàn)的一種致癌因子，它可以干擾抑癌因子蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A，PP2A)，導(dǎo)致人體細胞無節(jié)制地增殖。CIP2A蛋白主要位于人類腫瘤細胞的細胞質(zhì)。目前研究顯示CIP2A基因定位于染色體3q13.13，DNA長度約為38.8 kb，mRNA長為4284 bp，含有21個外顯子，有一個編碼905個氨基酸的開放讀碼框(ORF)，蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量為102 kD，其確切結(jié)構(gòu)仍未被充分認識[6-7]。但已證實其在多種惡性腫瘤中均高表達如乳腺癌、食管癌、胃癌、肝癌、非小細胞肺癌等惡性腫瘤中呈高表達。在多種人良性組織樣本中低表達，如結(jié)腸、胸腺、脾、子宮、胎盤、甲狀腺等[8-9]。
本研究結(jié)果顯示，CIP2A在前列腺癌中的陽性表達率為64.62%(42/65)，明顯高于在良性前列腺增生的陽性率表達29.23%(19/65)，進一步探討CIP2A的表達與患者年齡、術(shù)后1年腫瘤轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)、分化程度、臨床分期、術(shù)前血清中PSA水平的關(guān)系，結(jié)果顯示CIP2A的陽性表達與術(shù)后1年腫瘤轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)、分化程度、臨床分期、術(shù)前血清中PSA水平有關(guān)。分化越低，分期越晚，CIP2A的陽性表達率越高。與相關(guān)研究結(jié)果一致[10-12]。
本研究還顯示，通過對血清中不同水平PSA值患者的CIP2A水平進行分析，PSA≥10 ng/mL患者的CIP2A的陽性表達明顯高于<10 ng/mL患者的陽性率。PSA仍然是目前診斷前列腺癌的主要標志物之一，正常男性血清中PSA<4 ng/mL，當(dāng)血清PSA>10 ng/mL則高度懷疑患有前列腺癌[13-14]。在此之間往往提示需要進行穿刺活檢，二者聯(lián)合檢查能為前列腺癌患者提供更敏感而特異的診斷工具。
綜上所述，CIP2A有望成為前列腺癌早期診斷、預(yù)測復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移及預(yù)后評價的一個重要的生物學(xué)指標。聯(lián)合檢測血清中PSA水平更有助為前列腺癌的早期診治提供依據(jù)，為前列腺癌的臨床治療提供新思路。
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