發(fā)布時間：2014-10-24所屬分類：醫(yī)學(xué)職稱論文瀏覽：1次
摘 要： 大局菌群主要存在于水及動物的腸道，是食品及水受糞便污染的主要細(xì)菌衛(wèi)生學(xué)指標(biāo)，因此大腸菌群檢測是評價(jià)食品衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標(biāo)。大腸菌群是一群能在37C環(huán)境下24h發(fā)酵、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽抱桿菌，主要包括四屬:大腸埃希民菌屬、拘橡
大局菌群主要存在于水及動物的腸道，是食品及水受糞便污染的主要細(xì)菌衛(wèi)生學(xué)指標(biāo)，因此大腸菌群檢測是評價(jià)食品衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標(biāo)。大腸菌群是一群能在37"C環(huán)境下24h發(fā)酵、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽抱桿菌，主要包括四屬:大腸埃希民菌屬、拘橡酸桿菌屬、克雷伯民菌屬、腸桿菌屬。食品衛(wèi)生法規(guī)定:食品中不允許含有傷寒、副傷寒、沙門氏、躪疾、霍亂等消化系統(tǒng)病源菌，但這些致病菌卻實(shí)際上不可能在各個場合中檢測出來。
醫(yī)學(xué)論文推薦：《中國社區(qū)醫(yī)師》雜志由吉林東北亞出版?zhèn)髅郊瘓F(tuán)有限公司主管、主辦。中國核心期刊(遴選)數(shù)據(jù)庫期刊、CNKI中國學(xué)術(shù)期刊網(wǎng)收錄期刊、中文科技期刊數(shù)據(jù)庫收錄期刊。1987年7月1日創(chuàng)刊，國際標(biāo)準(zhǔn)刊號：ISSN l007—614X，國內(nèi)統(tǒng)一刊號：CN 22-1405/R，郵發(fā)代號：12-91，每月二期。復(fù)合影響因子： 0.053，綜合影響因子： 0.031
從同源角度看，把容易檢出的大腸菌群從食品中檢出便意味著該食品受人畜糞便污染。因該菌主要來源于人畜糞便，所以，對大腸菌群的測定常常被作為受糞便污染程度的唯→指標(biāo)，具有廣泛的衛(wèi)生學(xué)意義。有些血清型大腸菌經(jīng)口傳染人煬道后會引起嬰兒腹礙。大腸菌侵入人體其它部位還會引起尿道炎、膀脫炎，有時引起輸卵管炎、腎孟腎炎、膽道炎、子宮炎，并能引起產(chǎn)后敗血癥及新生兒敗血癥等。大腸菌群還是小兒消化不良癥、胃腸障礙的→個病源學(xué)因素。
我國現(xiàn)行檢測大腸菌群的方法有國家標(biāo)準(zhǔn)方法GB4789.3-1994(三步多管發(fā)酵法)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SN0168-1992。國標(biāo)法的檢驗(yàn)程序較復(fù)雜，需經(jīng)過初發(fā)酵試驗(yàn)→確定試驗(yàn)→終結(jié)試驗(yàn)(復(fù)發(fā)酵試驗(yàn))。一般需3-4d，不適于衛(wèi)生監(jiān)測。如果不能及時監(jiān)測食品衛(wèi)生，常常使腸道傳染病在夏秋季直線上升。為了積極預(yù)防腸道傳染病，保護(hù)消費(fèi)者的合法權(quán)益和身體健康，為了改變目前檢驗(yàn)不能適應(yīng)生產(chǎn)和消費(fèi)的狀況，許多學(xué)者研究了快速檢驗(yàn)大腸菌群方法，如快速酶法、濾膜法、紙片法、平板法等。本文就國內(nèi)外的一些快速檢驗(yàn)大腸菌群方法的研究現(xiàn)狀做一綜述。
1快速酶法
1978年Warren率先研究檢測半乳糖苦酶(β-GA-LA)，作為快速檢測大腸菌群的手段，而后Mobery1985)，Berg(1988)，edberrg(1990)都研究了酶檢測技術(shù)。美國公共衛(wèi)生協(xié)會(1989)編《水與廢水檢查標(biāo)準(zhǔn)方法》一書中，規(guī)定β-GALA和氧化酶(oxidase)的檢測為快速確定(24h)大腸菌群的方法。其原理是使用人工合成的半乳糖與色基的結(jié)合物作為β-半乳糖背酶底物，當(dāng)?shù)孜锉患?xì)菌產(chǎn)生的酶水解后色基游離，顯色或發(fā)熒光，證明有大腸菌群的存在。(細(xì)菌分解乳糖需要兩種酶:一是半乳糖背滲透酶，另一種是β-半乳糖昔滲透酶，它存在于菌體中，它可將進(jìn)入菌體細(xì)胞的乳糖分解為葡萄糖和半乳糖。)目前，常用底物有5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(X-gal)、3、4-環(huán)己酮-β-D-半乳糖苷、8-羚基喳琳-β-D-半乳糖昔等。
1.1 4-甲基傘型酮-β-D-半乳糖背(4-MU-β-D-galactoside)為底物的快速酶法底物被細(xì)菌分解為4-甲基傘型酮和糖苷，其中4-甲基傘型酮是熒光物質(zhì)。從國標(biāo)法初發(fā)酵管中，吸取產(chǎn)酸產(chǎn)氣的菌液，滴于濾紙上進(jìn)行β-半乳糖背酶及氧化酶檢測。若試驗(yàn)的濾紙?jiān)陂L波段紫外線燈下發(fā)綠熒光，而氧化酶試驗(yàn)為陰性的革蘭氏陰性桿菌，則確定該初發(fā)酵管存在大腸桿菌，無須再作平板分離與復(fù)發(fā)酵。
1.2茜素-β-D-半乳糖苷酶(Aliz-gal)為底物的快速酶法 2000年James等報(bào)道了一種新的檢測大腸菌群的酶底物:茜素-β-D-半乳糖苷酶(Aliz-gal)。該試劑具有較其它試劑更靈敏的性能，可提高檢測的靈敏度。
茜素-β-D-半乳糖背酶(Al泣-gal)的合成:將茜素懸浮于丙酮和氫氧化仰的混合液內(nèi)，加入漠代乙酷半乳糖的丙酮溶液，攪拌lOh。減壓蒸館除去丙酮，將產(chǎn)物過濾、水洗、干燥，溶于二氯甲燒，用氧化鋁吸除游離茜素，過濾，蒸發(fā)除去二氯甲烷，在乙醇中重結(jié)晶，得茜素乙酸半乳糖，再于甲醇堿溶液中脫酷而得。茜素-β-D-半乳糖苷酶(Aliz-gal)培養(yǎng)基的制備:茜素-β-D-半乳糖昔酶(Aliz-gal)50mg，蛋白腺20g，無水磷酸氫二餌2.75g，氧化納掠，月桂基硫酸納O.lg，異丙基硫代半乳糖背0.03g，硫酸鋁餌(或擰橡酸鐵鍍)O.5g，擰橡酸鐵鍍O.1g，瓊脂15g，蒸館水100Oml。調(diào)pH值至7.4，116°C高壓滅菌lOmin。
研究結(jié)果表明，茜素-β-D-半乳糖苦酶(A1iz-gal)是檢測食品中大腸菌群的一個很好的試劑，它具有高度的敏感性和準(zhǔn)確性，可在18-24h內(nèi)顯示出半乳糖酶反應(yīng)，達(dá)到準(zhǔn)確測定大腸菌群的目的。在同類性質(zhì)的酶底物中，茜素-β-D-半乳糖昔酶(Aliz-gal)的用量較低，可以和不同的陽離子(Fe、AI)形成帶色的混合物，這樣就便于和其他的顯色劑合用，組成具有多種性能的鑒別培養(yǎng)基。與同類培養(yǎng)基相比，茜素-β-D-半乳糖昔酶(Aliz-gal)可做傾注培養(yǎng)，在瓊脂深層菌落特征仍很明顯，而其他同類培養(yǎng)基只能做涂布培養(yǎng)�？傊�，試驗(yàn)證明用茜素-β-D-半乳糖苷酶(Aliz-gal)底物檢測食品中的大腸菌群，具有特異性強(qiáng)、速度快、準(zhǔn)確率高的特點(diǎn)，且穩(wěn)定性較高，可作為標(biāo)準(zhǔn)方法加以應(yīng)用。
1.3大腸菌群產(chǎn)色基質(zhì)試驗(yàn) 大腸菌群產(chǎn)色基質(zhì)試驗(yàn)，也稱為Autoanlysiscolilert(AC)法。此法1992年已被美國標(biāo)準(zhǔn)方法委員會在18版《水與廢水檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)方法》中選用。(1)AC法原理:將一種可被微生物水解的基質(zhì)作為待測微生物的特殊基質(zhì)，這種基質(zhì)也稱為營養(yǎng)物，它具有指示劑和營養(yǎng)物的雙重作用，在微生物作用下產(chǎn)生顏色變化或進(jìn)一步發(fā)生熒光，通過肉眼觀察或再配一個手持式長波紫外線燈(波長為366nm)即可獲得結(jié)果。產(chǎn)色基質(zhì)如鄰-硝基苯-β-D-毗喃半乳糖苷(ONPG)被用于檢測由總大腸菌群細(xì)菌產(chǎn)生的β-D-半乳糖苦酶，該酶水解基質(zhì)使產(chǎn)生一種顏色變化，在24-28h內(nèi)不需增加其它的手續(xù)即可指示和證實(shí)該實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽性。產(chǎn)色基質(zhì)4-甲基傘型基-β-D-葡糖苷酸(MUG)被用于檢測大腸埃希氏菌(大腸桿菌，Escherichiacoli)。(2)AC法培養(yǎng)基配方。
粉末狀配方含有如下無水化合物(制備每升基質(zhì)):(NH4)2S04 5.00g，MnS04O.0005g，ZNso4 O. 0005g， MgS04 O. 10g， Nacl10. 0g， CaCl2 O. 05g， Na2S03 O. 04g，AmpHotericin B O.OOlg，ONPG(鄰-硝基苯-β-D-口比喃半乳糖昔) O. 50g，MUG( 4-甲基傘型基-β-D-毗喃葡糖背酸) O. 075g，Solanium o. 50g， N~m咱46. 2g， KH2P04 O. 9g，鈾 鹽5. 3g，N -2 - hy由oxyethylpiperazine - N - 2 - ethane sul-fonic acid 6. 9g。以上培養(yǎng)基中Solanium為一種專利商品， 含有起乳化劑作用的植物提取物，并含有某些抗生素。為確保良好的試劑質(zhì)量和結(jié)果的一致性，需要使用配置好的商品基質(zhì)試劑。
本文由我站整理發(fā)布，轉(zhuǎn)載請注明出處！
培養(yǎng)基平皿法檢測大腸菌群
1大腸菌群直接計(jì)數(shù)的快速方法(1)培養(yǎng)基:營養(yǎng)瓊 脂36g，乳糖10g，l%澳靡香革酚蘭1ml，蒸餾水1000ml，121C滅菌15min。(2)實(shí)驗(yàn)方法:無菌操作吸取固體樣品 的10倍及100倍稀釋液各1ml至2只元菌平皿中，傾注上述備好的巳冷卻至46C培養(yǎng)基，搖勻，經(jīng)37C 24h培養(yǎng)，觀...
大腸菌群快檢紙片法
在衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)檢測中，大腸菌群快速檢測紙片法(簡稱紙片法)，因其操作簡便、快速、敏感、省料、結(jié)果易判斷等特點(diǎn)，早已被西方發(fā)達(dá)國家所采用。1980年Lukgantseve就有成功報(bào)道，隨后Barlt( 1984)、Ratto(1989)、Castillo(1994)也有報(bào)道，盡管它們所用檢測紙片...
檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)在社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中的應(yīng)用
1對象與方法 1.1調(diào)查對象運(yùn)用方便取樣方法，對2008年11月至12月問我院管轄的18家社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心就診患者或居民及服務(wù)中心的醫(yī)務(wù)人員進(jìn)行調(diào)查研究。在該研究中服務(wù)中心患者及居民950人、醫(yī)生70人、護(hù)士80人、其他醫(yī)技人員為50人。 1.2方法開展問卷調(diào)查，實(shí)...
研討補(bǔ)體活化與妊高征的關(guān)系-理化檢驗(yàn)化學(xué)分冊投稿
理化檢驗(yàn)化學(xué)分冊投稿 醫(yī)學(xué)檢查論文 醫(yī)學(xué)影像論文 醫(yī)學(xué)超聲論文 一、補(bǔ)體活化及其生物學(xué)意義 補(bǔ)體是存在于人類和脊椎動物體液中的一組具有酶原活性的糖蛋白。人體內(nèi)補(bǔ)體系統(tǒng)活化有兩條途徑，即經(jīng)典途徑和旁路途徑。經(jīng)典途徑由C1q 與免疫復(fù)合物結(jié)合而觸發(fā)，依...
