發布時間：2021-09-27所屬分類：工程師職稱論文瀏覽：1次
摘 要： 摘要：目的建立HPLC法測定鹽酸氨溴索口服液中蔗糖和山梨醇含量的方法，并考察全國范圍內20個生產企業的添加情況。方法采用HYPERSIL氨基色譜柱(4.6mm250mm，5m)，以乙腈-水(80﹕20，V/V)為流動相，流速1.0mLmin-1，柱溫為35℃，示差折光檢測器。結果鹽酸氨溴
摘要：目的建立HPLC法測定鹽酸氨溴索口服液中蔗糖和山梨醇含量的方法，并考察全國范圍內20個生產企業的添加情況。方法采用HYPERSIL氨基色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)，以乙腈-水(80﹕20，V/V)為流動相，流速1.0mL·min-1，柱溫為35℃，示差折光檢測器。結果鹽酸氨溴索與蔗糖和山梨醇均能良好分離，并分別在1~10mg·mL-1范圍內，蔗糖(r=0.9996，n=6)、山梨醇(r=0.9999，n=6)線性關系良好;定量限分別為8.03和8.04μg;平均回收率(n=9)分別為101.0%和100.9%，RSD分別為1.03%和0.97%。對全國范圍內20個生產企業的樣品進行測定，個別企業測定的結果與生產處方不一致。結論所建方法簡單易行，準確可靠、重復性良好，為測定口服溶液中矯味劑的添加情況及質量評價奠定了基礎。
關鍵詞：鹽酸氨溴索口服液;蔗糖;山梨醇;高效液相色譜;示差折光
口服溶液經常會添加矯味劑，以掩蓋藥物的咸、澀和苦味，包括天然和人工合成二大類，大部分甜味劑是人工合成的，大量攝入會產生一定的毒副作用，會導致高血糖、肥胖等代謝性疾病，可能還有一定的致癌性[1-2]，且兒童為口服溶液的主要使用群體，所以甜味劑在使用過程中必須嚴格控制用量[3]。
此次國評共收集到22個生產企業的鹽酸氨溴索口服液，根據生產廠家提供的生產工藝和資料分析，口服溶液中使用甜味劑主要阿司帕坦、AK糖、糖精鈉、山梨醇、蔗糖等。查閱文獻，已有報道大多采用紫外檢測的方法，但對于沒有紫外吸收的蔗糖、山梨醇等未能檢測[4-10]，而此兩種矯味劑應用最多。本文建立了高效液相色譜-示差折光檢測的方法測定蔗糖、山梨醇的添加量，同時考察了全國范圍內該產品的添加情況。阿司帕坦、AK糖、糖精鈉和本產品的抑菌劑采用高效液相色譜-紫外檢測器檢測(另有研究報告)。
1儀器與試劑
1.1儀器Agilent1260高效液相色譜儀(配備DAD檢測器)，瑞士梅特勒電子分析天平(型號：XPE205)，高純水機(美國Millipore公司)。
1.2試藥及試劑
試藥：22個生產企業的63批樣品均來自2020年國家評價性抽驗樣品。山梨醇(批號：F675G，企業提供);蔗糖(批號：FL1001200311-1，企業提供)。試劑：乙腈(Sigma，色譜純)，超純水。
2方法與結果
2.1色譜條件
采用HYPERSIL氨基柱(4.6mm×250mm，5μm);流動相：乙腈-水(80﹕20，V/V);示差折光檢測器;柱溫：35℃;流速：1.0mL·min-1;進樣體積：20µL。
2.2溶液的制備
2.2.1系統適用性溶液分別取山梨醇、蔗糖原料各適量，加水溶解并稀釋制成5mg·mL-1的溶液，作為系統適用性溶液。系統適應性色譜圖見圖1。理論板數分別按山梨醇和蔗糖計算，應大于2000，山梨醇與蔗糖的分離度應不小于1.5。
2.2.2標準曲線的制備分別取山梨醇、蔗糖原料各適量，加水溶解并稀釋制成10mg·mL-1的溶液作為對照品貯備溶液。將對照品貯備溶液逐級稀釋成濃度分別為1，3，4，6，10mg·mL-1的線性對照溶液。
2.2.3供試品溶液的制備根據山梨醇、蔗糖的處方量，精密量取鹽酸氨溴索口服溶液適量，加水溶解并稀釋制成各含山梨醇、蔗糖分別為3~6mg·mL-1的溶液，搖勻，作為供試品溶液。
2.3方法學驗證
2.3.1線性關系依據各生產企業處方涉及甜味劑的線性范圍，4種防腐劑和山梨醇及蔗糖標準曲線溶液配置方法參照“2.2.2”項。以對應的色譜圖峰面積為縱坐標(y)，質量濃度為橫坐標(x，mg·mL-1)進行回歸分析。線性方程分別為：山梨醇y=2.15×105x-7.45×104，r=0.9996;蔗糖y=2.15×105x-1.51×105，r=0.9999。結果表明，山梨醇、蔗糖在各自濃度范圍內線性關系良好。
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2.3.2重復性試驗企業18的生產處方既添加了蔗糖又添加了山梨醇，故選擇企業18的某一批樣品(批號：200107)按照“2.2.3”項下平行制備6份溶液，進行重復性考察，6份樣品中山梨醇、蔗糖測得含量的RSD均分別為0.62%和1.44%，均小于2.0%。
2.3.3精密度試驗將對照溶液(6mg·mL-1)重復進樣6次，山梨醇、蔗糖峰面積的RSD分別為1.75%和1.70%，均小于2.0%。
2.3.4準確度試驗將除過山梨醇、蔗糖外，處方中的其他組分按照處方量混勻作為空白基質，再將山梨醇、蔗糖對照貯備液按照處方80%，100%，120%加入，每個濃度平行制備3份樣品，共9份樣品。按照供試品制備方法同法處理，即得。測定結果見表2。
由于山梨醇在處方中的含量在5%~30%之間，蔗糖在處方中的含量在0.1%~30%之間，根據2020年版中國藥典四部9101規定[11]，山梨醇、蔗糖的平均回收率分別為101.1%、100.9%，RSD分別為1.03%、0.97%，均符合規定，表明所建立的方測定2種甜味劑含量準確度良好。
2.3.5檢測限和定量限以線性1mg·mL-1溶液逐步稀釋，以S/N=3的濃度為檢測限，以S/N=10的濃度為定量限，結果見表3。
2.3.6專屬性試驗取空白溶液、流動相、除山梨醇蔗糖外的輔料混合溶液和鹽酸氨溴索溶液進樣，在山梨醇和蔗糖色譜峰位置處均未出峰，證明無干擾，色譜圖見圖2。
2.4樣品測定采用所建立的方法對20家生產廠家50批樣品進行測定，采用外標法定量，結果見表4。樣品相關圖譜見圖3。
各生產企業樣品山梨醇與蔗糖的測得量，與其生產處方比較，由上表可知：山梨醇的測定結果占處方加入比為94%~107%，與處方基本一致;而蔗糖的測定結果占處方加入比為19%~100%，部分企業測定結果較加入量偏低，與處方規定量有較大出入。
3討論
3.1色譜柱的選擇
實驗開始選用資生堂CAPCELLPAKC18MGⅡ(4.6mm×250mm，5μm)色譜柱，采用乙腈-水體系，改變比例，山梨醇及蔗糖均未出峰。更換為ThermcAPS-2HYPERSIL氨基柱(4.6mm×250mm，5μm)，采用流動相比例乙腈-水體系，檢出山梨醇和蔗糖，且能良好分離度。
3.2流動相的選擇
選用甲醇-緩沖鹽體系，色譜峰形較差，無法分開待測成分。更換我乙腈-水體系，峰形得到很大改善，乙腈比例越大，分離度變好，最終選取乙腈-水(80﹕20，V/V)作為流動相。
3.3測定結果分析
本次實驗所測得蔗糖量占處方加入比為19%~100%，部分企業測定結果較加入量偏低較多，與處方規定量有較大出入。分析原因：一是矯味劑加入不足;而是在生產過程中有損失。矯味劑關系不僅關系到產品的口感，更關系到內在質量，比如酸堿度、微生物指標等。建議企業分析原因，嚴格規范矯味劑使用。——論文作者：王小亮，席志芳，張秉華，梁亞偉，鄧玉龍
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